[发明专利]来自B族链球菌的核酸和蛋白质

说明书

本发明涉及来自无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的蛋白质，编码这些蛋白质的核酸，和这些蛋白质作为抗原和/或免疫原的应用和在检测/诊断方面的应用。本发明也涉及细菌基因组的快速筛选以分离和表征细菌细胞被膜关联或分泌的蛋白质的方法。

B族链球菌(Group B Streptococcus)(GBS)(无乳链球菌)是一种有荚膜的细菌，该细菌作为引起新生儿和成人脓毒症和脑膜炎的人类主要的病原在1970年出现。出生后头5天的早期新生儿感染的发病率为每1000个活婴中有0.7到3.7个，感染婴儿的死亡率约20％。在早期感染中活下来的新生儿中通常有25-50％患有神经后遗症。出生后6天到3个月发生的新生儿晚期感染的发病率为每1000个活婴中有约0.5到1.0个。

分娩时母亲生殖道GBS的集群和新生儿脓毒症的危险性存在明显的联系。已发现人类直肠可以充当GBS的储存库。新生儿的易感性与针对引起人疾病的GBS上发现的荚膜多糖IgG抗体的低浓度或缺乏相关。在美国从临床病例中分离到的菌株通常属于荚膜血清型Ia，Ib，II，III，尽管血清型V可能具有越来越重要的意义。血清型VIII GBS是日本新生儿脓毒症的主要原因。

可能的预防方式涉及在分娩期内或产后向母亲施用抗生素，但这可能导致抗性微生物的出现，某些情况下可出现过敏反应。对青春期女性进行接种诱导母体来源的长时间持续的免疫是预防新生儿GBS感染的最有希望的方法之一。这些生物体的荚膜多糖抗原在疫苗的发展方面已经引起极大的关注。对健康成人志愿者的研究发现血清型Ia，II和III多糖是无毒的，它们分别在大约65％，95％和70％的非免疫成人中具有免疫原性。应用荚膜抗原作为疫苗的问题之一是反应率随着免疫前状态和多糖抗原的不同而改变，正如在人类志愿者体内用GBS多糖所作的接种研究所揭示的那样，不是所有的疫苗都可以产生足够水平的IgG抗体。

尽管反复刺激但一些人仍然不产生反应。这些特征是由于多糖抗原T-非依赖性的性质。提高这些疫苗的免疫原性的一个策略是将该疫苗与蛋白质结合增强多糖的T细胞依赖特性。多糖结合物的应用看来是有前途的，但关于载体蛋白质的性质仍然存在未解决的问题。抗GBS的结合疫苗将要求至少制备4种不同的结合物，这增加疫苗的成本。

建立在荚膜多糖应用基础上的抗GBS感染的疫苗接种方法有根据免疫前状态和所使用的特定多糖类型反应率可能会产生相当大变化的缺点。人类志愿者体内的结合疫苗实验结果已经提示对于一些关键的荚膜抗原反应率可能仅仅在65％左右(Larsson等，感染和免疫(Infection and Immunity)64：3518-3523(1996))。对疫苗产生反应的所有个体是否都将会产生足够水平的能穿越胎盘并且赋予新生儿免疫力的多糖特异性IgG也还不清楚。将蛋白质载体结合到多糖抗原上可能会将多糖抗原转化成T细胞依赖性抗原并且使它们的免疫原性提高。

应用GBS III型多糖-破伤风类毒素结合物进行的初步研究一直是鼓舞人心的(Baker等，感染性疾病综述(Reviews of InfectiousDiseases)7：458-467(1985)，Baker等，新英格兰医学杂志(The NewEngland J.of Medicine)319：1180-1185(1988)，Paoletti等，感染和免疫64：677-679(1996)，Paoletti等，感染和免疫62：3236-3243(1994))，但在发达国家，因为大部分成年人在过去的五年中都接受了抗破伤风免疫，破伤风的应用可能是有缺点的。用破伤风类毒素进行的加强免疫可能会引起不良反应(Boyer.，儿科学新观点(Current Opinions in Pediatrics)7：13-18(1995))。多糖结合物疫苗与许多其它种类的疫苗相比有制备和生产昂贵的缺点。也有在GBS多糖和包含唾液酸的人糖蛋白质之间产生交叉反应的可能危险。