[发明专利]由衰老体细胞克隆的动物中的端粒恢复和细胞寿命延长

权利要求书

1.一种复壮原代细胞的方法，包括：

a.将原代细胞、原代细胞的核或原代细胞的染色体移植到受体卵母细胞或卵中，以产生胚胎；

b.使用该胚胎获得内细胞团、胚盘和/或干细胞；

c.将内细胞团、胚盘和/或干细胞注射到无免疫应答的动物中，形成畸胎瘤；

d.分离得到的畸胎瘤；

e.为了鉴定特异细胞型，分离不同的胚层；

f.分离与原代细胞相同类型的细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述原代细胞是一种衰老细胞或接近衰老的细胞。

3.权利要求1的方法，其中从核移植畸胎瘤中分离的细胞含有与不是通过核移植技术产生的同龄对照畸胎瘤的细胞平均至少一样长的端粒。

4.权利要求3的方法，其中所述端粒平均长于不是通过核移植技术产生的同龄对照畸胎瘤的细胞。

5.权利要求2的方法，其中所述原代细胞是一种成纤维细胞。

6.权利要求1的方法，其中所述无免疫应答动物是SCID或裸鼠。

7.权利要求1的方法，其中所述原代细胞至少具有基因组上的一个改变。

8.一种产生与不同细胞型的第一种细胞有相同基因型的原代细胞的方法，包括：

a.将第一种细胞的核移植到受体卵母细胞中，以产生胚胎；

b.使用该胚胎获得内细胞团、胚盘和/或干细胞；

c.将内细胞团、胚盘和/或干细胞注射到无免疫应答的动物中，形成畸胎瘤；

d.分离得到的畸胎瘤；

e.为了鉴定特异细胞型，分离不同的胚层；

f.分离与第一种细胞不同类型的细胞，其中新原代细胞的端粒至少与不是通过核移植技术产生的畸胎瘤中同龄对照细胞的端粒一样长。

9.权利要求8的方法，其中所述第一种细胞是一种衰老细胞或接近衰老的细胞。

10.权利要求9的方法，其中所述第一种细胞是一种成纤维细胞。

11.权利要求8的方法，其中所述原代细胞是选自平滑肌、骨骼肌、心肌、皮肤和肾的类型。

12.权利要求8的方法，其进一步包括在生长因子的存在下培养不同类型的细胞，以促进进一步的分化。

13.权利要求11的方法，其中用所述原代细胞产生组织(用于向需要移植的患者中移植)。

14.权利要求8的方法，其中第一种细胞的基因组在核移植之前改变。

15.通过权利要求8的方法分离的细胞。

16.通过权利要求13的方法分离的组织。

17.权利要求7的方法，其中所述遗传改变包括至少一种异源基因的转染。

18.权利要求7的方法，其中所述遗传改变包括至少一种天然基因的破坏。

19.权利要求14的方法，其中所述遗传改变包括至少一种异源基因的转染。

20.权利要求14的方法，其中所述遗传改变包括至少一种天然基因的破坏。

21.一种对原代细胞进行复合遗传操作的方法，包括在遗传操作之间利用向受体卵母细胞中核移植复壮该原代细胞，其中在核移植之前将该细胞传代为衰老或接近衰老的状态。

22.一种对原代细胞进行复合遗传操作的方法，包括在遗传操作之间利用向受体卵母细胞中核移植复壮该原代细胞，其中在核移植之前将该细胞诱导为衰老样或接近衰老样状态。

23.权利要求21的方法，复壮由此产生含有的端粒平均与同龄对照胚胎细胞一样长的胚胎细胞。

24.根据权利要求21的方法遗传改变的一种原代细胞。

25.一种生产与权利要求24的细胞有相同基因型的遗传改变的动物的方法，包括：

a.将所述细胞的核移植到受体卵母细胞中，

b.用该具核卵母细胞产生胚胎或胚胎干细胞，

c.将胚胎或胚胎干细胞导入雌性受体中，和

d.使胚胎或胚胎干细胞完全发育，使得雌性分娩与原代细胞有相同基因型的新生动物。