[发明专利]制备二肽的方法以及该方法的中间产物

说明书

本发明涉及制备下式1的二肽的方法，其中G是一个保护基，而N保护性L-亮氨酸在一种活化剂存在下与L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺偶合。

WO-A-96/11209公开的方法中N-(1，1-二甲基乙氧基)羰基-L-亮氨酸与L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺偶合。

该已知方法的缺点是使用昂贵的保护基团，因此从商业的观点来看，此方法缺少吸引力。本发明提供一种具有商业价值的方法，用于制备在制备例如WO-A-96/11209介绍的药物中的上述中间产物。

按照本发明应用甲酰基作保护基来实现此目的。

涉及两个氨基酸偶合的二肽偶合是通常的已知方法，并且在文献中有详细说明。在这些偶合中，最终的N端氨基酸的活化酸基团与最终的C端氨基酸或氨基酸衍生物的氨基反应。本方法中最终的N端氨基酸的氨基基团借助于保护基团保护。

本发明的方法中，两种富含对映异构体的氨基酸进行偶合。富含对映异构体的氨基酸的对映体过量优选大于80％，尤其优选大于90％，更特别优选大于98％。众所周知，氨基酸偶合时N端氨基酸可能产生外消旋作用。当使用甲酰基保护基时尤其如此，例如thehandbooks Houben-Weyl，Band 15/1(1974)，第166页以及在ThePeptides，Academic Press 1979，第1卷，第279页中介绍的那样。因此，人们不将甲酰基保护基团用于富含对映异构体的氨基酸偶合。目前，申请人发现，当按照本发明用甲酰基作保护基团进行偶合时，不发生外消旋或只有很低程度的外消旋。此外，申请人发现，假如发生外消旋作用，根据本发明的偶合产物尤其适合通过结晶富集需要的非对映形。

本发明方法的另一优势是在所述方法中可以使用廉价活化剂。

本发明方法中使用的N-甲酰基-L-亮氨酸可以用已知方法制备，举例来说使L-亮氨酸与甲酸以及例如一种酸酐接触制备。优选使用醋酸酐。

L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺的制备举例来说能够由L-叔亮氨酸如下制备：L-叔亮氨酸和光气转换成L-叔亮氨酸-N-羧基酐，再用N-甲胺将它转换成L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺。

在本发明方法中使用一种活化剂和一种碱活化N-甲酰基-L-亮氨酸，活化剂优选具有空间位阻的酰基氯或氯甲酸烷酯。这种活化步骤为众所周知的方法并且在肽偶合中经常应用。因此，选用的碱优选为所述活化步骤中使用的、外消旋程度低的已知碱。作为碱优选使用N-甲基吗啉。

进行活化的温度不是非常重要，实践中通常为-30℃至+30℃，优选-20℃至+10℃。

如果需要，在溶剂中进行活化，优选在反应混合物中呈惰性的溶剂。酯性溶剂实例有酯类，尤其是醋酸乙酯、醋酸异丙酯和醋酸异丁酯；醚类，尤其是四氢呋喃(THF)、甲基-叔-丁基醚(MTBE)以及二氧杂环己烷；腈类，尤其是乙腈。

在一个实施方案中，首先进行活化，然后进行偶合步骤。对于偶合，使活化的N-甲酰基-L-亮氨酸与L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺接触。优选使用L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺溶液。

原则上，偶合反应温度与活化作用温度保持一致。优选偶合温度与活化温度大致相同。L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺的合适溶剂的实例有醇类，尤其是甲醇、乙醇以及异丙醇；酯类，尤其是醋酸乙酯、醋酸异丙酯以及醋酸异丁酯；醚类，尤其是THF、MTBE和二氧杂环己烷。

另一方面，也可以采用一步法进行活化以及偶合反应，其中N-甲酰基-亮氨酸、L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺以及所述碱溶解于上述的合适溶剂中，并将所述活化剂加入该溶液。

然后，合成的N-甲酰基-L-亮氨酰-L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺可以用通常的已知方法去甲酰化，例如在酸性环境中。去甲酰化可以例如在水性环境、水/醇混合物或两相体系中进行。

进行去甲酰的温度例如为20℃-110℃，优选40℃-80℃。如果需要，例如通过结晶可以纯化合成的N-甲酰基-L-亮氨酰-L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺或L-亮氨酰-L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺。令人惊奇的发现是，肽偶合发生外消旋的情况下，结晶可增加保护或未保护的二肽中的N端氨基酸的对映体过量。

可用于结晶的合适溶剂的实例有烃类，尤其是庚烷和己烷；酯类，尤其是醋酸异丙酯、醋酸异丁酯和醋酸乙酯；醚类，尤其是MTBE；醇类，尤其是甲醇、乙醇、异丙醇以及丁醇；或者它们的混合物。合适的溶剂混合物实例为庚烷和醋酸异丙酯的混合物。

进行结晶的温度并不特别重要，主要取决于所选溶剂的物理参数，尤其是沸点。实践中，通常在20℃-100℃之间进行结晶。