[发明专利]纤维蛋白溶酶原激活剂的反相HPLC分析

权利要求书

1.一种监控纯化工艺从含有人tPA或其变体的样品中除去中国仓鼠卵巢(CHO)细胞内源性纤维蛋白溶酶原激活剂(PA)的有效性的方法，该方法包括使所述样品与能特异性裂解人类野生型tPA中Arg₂₇₅-Ile₂₇₆键的蛋白酶一起保温，然后与含有有效量的能使人类野生型tPA中二硫键还原的变性剂和还原剂一起保温；对该样品实施反相高效液相层析步骤，分析层析步骤的洗脱图谱，以便得出其中出现的CHO细胞内源性PA的量。

2.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶是纤维蛋白溶酶原。

3.权利要求1的方法，其中所述人类tPA是天然序列tPA。

4.权利要求1的方法，其中所述tPA变体是TNK-tPA。

5.权利要求1的方法，其中在所述保温前，将样品用消化缓冲液稀释。

6.权利要求5的方法，其中所述缓冲液的pH为约7-8。

7.权利要求6的方法，其中所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。

8.权利要求7的方法，其中所述缓冲液还包含精氨酸。

9.权利要求1的方法，其中所述变性剂包括尿素或胍。

10.权利要求1的方法，其中所述还原剂包括二硫苏糖醇或2-巯基乙醇。

11.权利要求1的方法，其中所述层析步骤通过用含有乙腈的溶剂以一定的乙腈梯度进行洗脱来实施。