[发明专利]干细胞因子纯化方法

说明书

                            发明领域

                本发明涉及新的干细胞因子纯化方法。

                            发明背景

干细胞因子SCF(Stem Cell Factor)是1990年分别由William，DW，Zsebo，KM，Huang，EW为首的三个不同实验小组几乎同时发现的^[1-3]，([1]Williams DE，Eisenman J，Baird A et al.Identification of a ligand for the c-kit proto-oncogene.Cell，1990；63(2)：167-174.[2]Zsebo KM，Wypych J，McNiece IK et al.Identification，purification，and biological characterization of hematopoietic stem cell factorfrom buffalo rat liver-conditioned medium.Cell，1990；63(2)：195-201.[3]Huang E，Nocka K，Beier DR et al.The hematopoietic growth factor KL is encoded by the S1 locus and isthe ligand of the c-kit receptor，the gene product of the W locus.Cell 1990；63(2)：225-233.)它是原癌基因c-kit产物的一个胞外配体。根据其刺激细胞生长、结合受体特性又被称为肥大细胞生长因子(Mast Cell Growth Factor)、Steel因子(Steel factor)、kit配体(KitLigand)等。

SCF在体内是一种糖蛋白，含N-连，O-连糖基，由于糖基化程度不同，分子量呈多形性。来源于E.coli的非糖基化的重组SCF具有生物活性，这说明糖基化对生物活性影响不大。SCF是一种对造血细胞、神经细胞、原始生殖细胞、肠上皮干细胞等都有重要作用的因子，其中它对造血细胞的作用最为明显。它主要作用于早期多能干细胞、祖细胞，同时对晚期成熟血细胞也有作用。它与IL-1β、IL-3、IL-6、IL-11、G-CSF、GM-CSF及EPO等联合应用具有明显的协同作用，能刺激来源于骨髓、外周血、脐血的CD34⁺祖细胞的扩增。SCF在抗放射、肿瘤放疗化疗的辅助治疗、造血前体细胞移植，贫血和其它血液病的治疗上具有良好的应用前景。

人SCF已在原核表达系统中克隆表达，原核表达的人SCF以包涵体形式存在。要得到活性形式的SCF，必需先将包涵体变性和复性，然后从复性液中纯化SCF。但复性液中除含低浓度构型正确的SCF外，还含有宿主蛋白、核酸、SCF异构体和变性剂等，其中SCF异构体包括未形成正确的分子内二硫键的SCF。而作为药用或研究用，非常希望SCF是一种基本去除宿主蛋白、核酸、SCF异构体和变性剂等杂质的高纯状态。因此需要一种完成这一目标的纯化SCF的方法。同时，为了适应生产的需要，还要求该方法个有以下特点中的一个或多个：(1)回收率较高；(2)成本较低；(3)工艺稳定。

                              发明概要本发明通过提供一种纯化溶液中人干细胞因子(SCF)的方法来填补这一需要。该方法包括：(a)将含人干细胞因子的溶液进行阴离子交换，由此得含SCF的级份；(b)将含SCF级份进行疏水色谱分离，由此得纯化的SCF的级份。该方法可用于原核表达体系表达的SCF。

本发明还提供一种用阴离子交换色谱从含变性剂的人干细胞因子(SCF)稀溶液中快速浓缩，分离SCF的方法，其中变性剂可以为0.2-8mol/L的尿素，或0.1-10％非离子型表面活性剂，如：吐温、曲拉通等。

本发明还提供一种用疏水色谱从含SCF异构体的溶液中分离具有天然构型SCF的方法。