[发明专利]新的肝再生相关蛋白、其编码序列及用途

说明书

本发明属于分子生物学和医学领域，具体地说，本发明涉及新的编码肝再生相关蛋白-LRTM4的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。具体地说，本发明的多肽是一种新的与肝再生有关的肝再生相关蛋白。

肝脏具有明显的再生现象，肝脏部分切除后，或受到物理及化学损伤时，肝脏就开始再生，并且再生持续到肝脏与身体的比例到达一定值时终止。肝再生现象与多种肝脏疾病相伴随，如肝硬化、急慢性肝炎等。肝癌的发生过程也往往伴随有肝再生现象；同时，临床上肝再生现象被应用于部分肝脏移植以及肝细胞移植。

肝癌是一种世界范围内的恶性肿瘤，死亡率极高，尤其中国是肝癌的高发病区。每年世界范围内有25万人死于肝癌，我国占了其中的40％(李绍白，《肝脏病学》，人民卫生出版社，1995)。肝癌的发生与病毒感染如乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染有关，食用含有黄曲霉毒素等致癌物质的水和食物等都是肝癌发病的主要因素。目前还发现肝癌发生与肝脏再生有密切的关系：肝癌发生的过程往往伴有肝再生现象。现已知道，肝再生是受到紧密调控的肝细胞增殖，而肝细胞癌是肝细胞不受控制的增殖。现在有的学说认为，肝癌发生的过程包括肝脏被病毒或化学物质损伤，持续的损伤导致持续的再生，再生失去控制后便成为肝癌。所以了解肝癌与肝再生的关系，无疑有助于人们更好地对早期肝癌进行预测与治疗。

目前，对于一些肝脏疾病的治疗最有效的方案是肝脏移植，而且肝脏移植手术的技术已经比较成熟，但是每年能够受益于这一技术的人数非常有限，这是因为目前的肝脏移植有两个方面受到限制：供体来源和免疫排斥。要想使更多的人受益于肝脏移植，就必须突破这两个限制。现在突破这个限制的主要策略是部分肝移植和肝细胞移植。部分肝移植可以使一个供体肝脏移植到两个人或者更多，同时也使亲属间肝脏移植成为可能，从而减少了免疫排斥。另外一个更理想的方案是肝细胞移植，即将肝细胞直接移植进病人肝脏或者脾脏部位，肝细胞逐渐再生，承担起肝脏的功能。肝细胞移植可以利用病人自己的肝细胞，从而不会发生免疫排斥现象；同时对病人肝细胞进行体外培养并导入特定的基因，能够进行基因治疗。

为了满足部分肝移植及肝细胞移植等的需求，本领域迫切需要了解与肝组织再生有关的因素，尤其是与肝再生有关的基因和蛋白。

本发明的目的是提供一种新的肝再生相关蛋白-LRTM4蛋白以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。本发明的LRTM4基因，是一个在国内外未见报道的新基因，对它的分子机制的研究有利于阐明肝脏再生的分子生物学机制，同时也可能用于肝脏疾病的基因治疗。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的LRTM4多肽，该多肽源自大鼠，它包含：具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

在本发明的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少75％相同性：(a)编码上述LRTM4多肽的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中335-940位的序列；(b)具有SEQ ID NO：1中1-1576位的序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有LRTM4蛋白活性的多肽的方法，该方法包含：(a)在适合表达LRTM4蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有LRTM4蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的LRTM4多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的15-1576个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗LRTM4多肽活性的化合物，以及抑制LRTM4多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是LRTM4多肽的编码序列(或其片段)的反义序列。