[发明专利]共表达人p53基因和人细胞因子基因的重组腺病毒及其制法和用途

权利要求书

1.一种共表达人p53基因和人细胞因子的重组腺病毒，其特征在于，该腺病毒的基因组缺失E1区和E3区，且在腺病毒基因组DNA的两端结合有末端肽TP，并且在E1区位置插入了人p53基因和人白细胞介素2基因表达盒，该表达盒依次包括：启动子序列，人p53以及人白细胞介素2和多聚腺苷酸化信号序列。

2.如权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，人p53基因和人细胞因子表达盒中还含有内部核糖体结合位点IRES，而且p53编码序列位于IRES之前，而人细胞因子编码序列位于IRES之后，所述的细胞因子选自下组：IL-2、IL-12、GM-CSF、IFN、IL-3、IL-4、IL-6、TNF。

3.如权利要求1或2所述重组腺病毒，其特征在于，该腺病毒为Ad5型腺病毒，所述的细胞因子是人白细胞介素2。

4.如权利要求1或2所述的重组腺病毒，其特征在于，人p53基因和人细胞因子表达盒中所含的启动子序列选自：巨细胞病毒启动子、牛乳头瘤病毒启动子。

5.如权利要求4所述的重组腺病毒，其特征在于，该腺病毒是表达人p53基因和人白细胞介素2基因的重组5型腺病毒Ad.p53-IL-2，CCTCC No.V200101。

6.一种药物组合物，其特征在于，它包括有效量的权利要求1所述的共表达人p53基因和人细胞因子基因的重组腺病毒，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，该重组腺病毒为Ad5型腺病毒，所述的细胞因子包括人白细胞介素2，且该人p53基因和人细胞因子基因表达盒中还含有内部核糖体结合位点IRES，而且p53编码序列位于IRES之前，而人白细胞介素2基因编码序列位于IRES之后。

8.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，该腺病毒是表达人p53基因和人白细胞介素2基因的重组5型腺病毒Ad.p53-IL-2，CCTCC No.V200101。

9.一种制备共表达人p53基因和人细胞因子基因的重组腺病毒的方法，其特征在于，该方法包括：

(a)提供腺病毒DNA-TP复合物，在该腺病毒DNA基因组缺失E1区和E3区，并且在腺病毒基因组DNA的两端结合有末端肽TP；

(b)提供含腺病毒基因组的粘粒载体，在该粘粒载体中的腺病毒基因组缺失了E1区和E3区，并且在E1区位置插入了人p53基因和人细胞因子基因表达盒，其中该表达盒依次包括：启动子序列，人p53基因和人细胞因子基因编码序列，和聚腺苷酸化信号序列；

(c)将步骤(a)中的腺病毒DNA-TP复合物和步骤(b)中的粘粒载体共转染表达E1区基因的宿主细胞；

(d)筛选阳性克隆；

(e)从阳性克隆中分离纯化重组腺病毒。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中共转染方法是磷酸钙DNA共沉淀转染法，该宿主细胞是293细胞，而且人p53基因和人细胞因子基因表达盒中所含的启动子序列选自：巨细胞病毒启动子、牛乳头瘤病毒启动子，且该人p53基因和人细胞因子基因表达盒中还含有内部核糖体结合位点IRES，而且人p53基因编码序列位于IRES之前，而人细胞因子基因编码序列位于IRES之后，且所述的细胞因子选自下组：IL-2、IL-12、GM-CSF、IFN、IL-3、IL-4、IL-6、TNF。