[发明专利]鉴别细胞特异性靶结构的方法

说明书

本发明涉及鉴别细胞特异性靶结构的方法。

鉴别细胞特异性靶结构对于验证可能导致生物体内无法估计的作用的细胞—细胞相互作用是关键的。特别地，了解疾病特异性靶结构是开发有效的同时副作用很小的药物的决定性必要条件。

现有技术已知免疫细胞(淋巴细胞)表达特异组合的蛋白质，也称为蛋白质组合模式，简称PCP，其负责结合脑和肌肉组织中的血管的内皮样细胞。其他蛋白质组合却不导致与这种内皮样细胞的结合。令人惊奇地，这些特异的组合是个体间一致的，总是显示相同的结合功能。其结果是，所述特异性蛋白质组合模式似乎是细胞表面的个体间一致的淋巴细胞结合密码，用于结合存在细胞特异性靶结构的器官特异性内皮样细胞表面。细胞特异性靶结构因此可显示相当特异的蛋白质组合模式。

浸润性肿瘤细胞表面也显示特异性蛋白质组合模式，其将导致目的明确的即器官选择性浸润行为。为此，这种蛋白质组合模式组成了可能的药物的靶结构。

然而，开发这种高选择性药物的一不可避免的必要条件是这种靶结构的分子组成的知识。

现有技术中公开了鉴别靶结构的方法，其是基于分析疾病组织或细胞的基因表达模式，与健康组织或细胞的基因表达模式相比较，蛋白质表达模式和信使核糖核酸(mRNA)均意在提供新蛋白质的表观、疾病组织或细胞中失控的或异常修饰的蛋白质的信息(例如：F.Lottspeich/H.Zorbas；Bioanalytik；Spektrum Analytischer Verlag；Heidelberg，1998)。

但是，这些方法均使用细胞匀浆物，其通常基于几千个或几百万个细胞，因为仅能通过这样大量的细胞才能产生上述的表达模式。在细胞匀浆物中，细胞以破碎的开放形式存在，从而可通过生物化学方法进行抽提和分离。

这些现有技术方法的一个缺点是它们不适合鉴别蛋白质组合模式，因为这种蛋白质组合模式中的各个蛋白质组分由于产生细胞匀浆物和随后的抽提步骤而完全分离，由此丧失了其细胞和组织拓扑学位置的相关信息。另外，破坏细胞区室使得不能获得这些细胞区室内的蛋白质组合及其相关拓扑学相互关系的信息。

另外，现有技术方法另一缺点是它们不能在一个细胞水平进行分析，从而不能指出各个细胞的不同方式的蛋白质组合模式。再者，仅以少量存在的蛋白质不能由现有技术方法检测。这在例如仅存在于少数致病性疾病特异性细胞中的蛋白质或特异性蛋白质组合的情况下尤其如此。

现有技术方法的另一缺点是制备组织或细胞的步骤从它们的取出或收集直至分离蛋白质的步骤可能受到各种可变的外部影响，不能控制和标准化。

因此，本发明的目的在于提供能够鉴别细胞特异性组合模式的方法，其克服了上述现有技术中的缺点。

本发明目的通过鉴别细胞特异性靶结构的创造性方法而实现，该方法包括如下步骤：(a)将包括至少一种标记分子的试剂溶液Y1自动沉积在含有来自细胞或组织样品的细胞和/或细胞膜的物体X1上；(b)使试剂溶液Y1反应，并自动检测用试剂溶液Y1标记的物体X1的至少一种标记模式；(c)在检测该标记模式之前或之后除去所述试剂溶液Y1，并用其他试剂溶液Yn(n＝2，3，…，N)重复步骤(a)和(b)，每种试剂溶液均含有所述的至少一种标记分子和/或至少另一种标记分子；(d)组合步骤(b)中检测的标记模式以得到物体X1的复合分子组合模式；(e)用含有来自不同的细胞或组织样品的其他细胞和/或其他细胞膜的至少另一种物体Xn(n＝2，3，…，N)重复步骤(a)至(d)；(f)确定物体X1和物体Xn的组合模式之间的至少一种差异；(g)鉴别其标记模式导致步骤(f)中确定的差异的至少一种试剂溶液Y1或Yn；(h)选择来自不同于步骤(f)确定的物体Xn的细胞或组织样品的细胞和/或细胞膜的匀浆物的由至少步骤(g)鉴别的试剂溶液Y1或Yn的标记分子结合的分子或分子复合物；以及(i)生物化学鉴定步骤(h)中选择的分子或分子复合物。