[发明专利]柯萨奇病毒B抗原酶免试剂盒及制备方法

说明书

本发明涉及生物技术产品，具体涉及一种柯萨奇病毒(Cox)B1-6混合型抗原试剂盒及制备方法。

柯萨奇病毒B1-6对易感人群具有高度的传染性，儿童是最敏感的人群，病毒流行期儿童的感染率通常为10-20％家庭中所有敏感成员通常都被感染，因此，柯萨奇病毒B感染所致的相关疾病发病率较高，尤其柯萨奇病毒性心肌炎对儿童具有很大威胁和危害。临床的早期诊断和有效治疗有很重要意义。以往柯萨奇病毒B感染和致病的病原学确诊法是病毒分离和心肌荧光染色，但这两种方法的标本采集和处理较复杂，病毒分离和取心肌荧光染色程序烦琐，实验时间很长，于临床确诊越早其疗效越好。因此病毒分离技术和取心肌荧光法的临床早期诊断优势不大。CoxB1-6病毒符合一般病毒感染后抗原和抗体(IgM、IgG)出现规律。病毒(抗原)血症期，首先在患者血中检测到病毒(抗原)，此期可持续1个月左右。病毒(抗原)出现1-2周后，出现CoxB1-6 IgM(可持续1-2周)，而后大约2周出现CoxB1-6-IgG，因此CoxB1-6混合抗原(CoxB1-6Ag)试剂盒能从血清中直接检测病毒是病毒早早期感染和复制的最主要标志。

本发明的目的在于克服以往方法的不足之处，研制一种灵敏度高和特异性高的能直接检测出CoxB1-6型病毒感染诊断试剂盒，可以比CoxB1-6IgM和IgG更早的确诊病原。

本发明提供了一种CoxB1-6-Ag ELISA试剂盒，该试剂盒用CoxB病毒B1-6混合型单克隆抗体包被，兔抗CoxB1-6病毒抗体IgG联接辣根过氧化物酶为检测抗体，检测血清中的CoxB病毒B1-6混合型抗原，试剂盒由下列组成：

预包被反应条    48孔/96孔    酶标记液       1瓶(3ml)

样品稀释液      1瓶(6ml)     阳性对照       1支(200μl)

阴性对照        1支(200μl)  20倍浓洗涤液   1瓶(13ml)

显色剂A         1瓶(3ml)     显色剂B        1瓶(3ml)

终止液          1瓶(3ml)

本发明的另一目的是提供了上述柯萨奇病毒B1-6混合型抗原ELISA试剂盒的制备方法，该方法包括下列步骤：一、原材料及其规格

(一)试剂盒制备用的原料病毒B1-6混合单克隆(Mc)抗体1∶10000阳性对照：诊断心肌炎患者血清，用本试剂盒测定A值＞0.8，放置-20

      ℃备用。阴性对照：选正常人血清，用本试剂盒测定A值＜0.09，放置-20℃备用。酶标抗体：兔抗CoxB1-6病毒IgG-HRP，辣根过氧化物酶，RZ＞3.0

      Sigma进口酶标记兔抗CoxB1-6病毒IgG，双扩散1∶64。其它试剂：

    Na₂CO₃                         A.R

    NaHCO₃                          A.R

    小牛血清                         杭州四季清厂生产

    Na₂HPO₄.12H₂O                 A.R

    NaH₂PO₄.2H₂O                  A.R

    NaCL                              A.R

    Tweel-20                          化学纯

    甘油                              化学纯

    H₂O₂                            A.R

    柠檬酸.H₂O                       A.R

    TMB                               熔点：168℃

    EDTA                              A.R

    H₂SO₄                          A.R