[发明专利]一种获得蛋白质水解物的方法

权利要求书

1.一种从蛋白质底物获得一种富含游离谷氨酸和/或肽结合的谷氨酸残基的水解物的方法，包括以下步骤：

(i)将该底物经过一种脱酰胺过程；

(ii)将该底物经过一种特异性作用蛋白水解酶的作用；且

(iii)将底物经过一种或多种非特异性作用的内和/或外肽酶的作用。

2.如权利要求1的方法，其中的脱酰胺过程按一种非酶法脱酰胺进行。

3.如权利要求1的方法，其中的脱酰胺过程按一种酶法脱酰胺进行。

4.如权利要求3的方法，其中的酶法脱酰胺过程通过将底物经过一种转谷氨酰胺酶的作用来进行。

5.如权利要求4的方法，其中的转谷氨酰胺酶源自卵菌纲，包括疫霉属的菌株，特别是恶疫霉，腐霉属的菌株、特别是畸雌腐霉，腐霉属，间型腐霉，终极腐霉和周雄腐霉(或缠器腐霉)。

6.如权利要求5的方法，其中的转谷氨酰胺酶是细菌来源的，且优选源自芽孢杆菌属的菌株，特别是枯草芽孢杆菌，链轮丝菌属的菌株，特别是茂原链轮丝菌，灰肉色链轮丝菌和肉桂链轮丝菌，以及链霉菌属的菌株，特别是利迪链霉菌。

7.如权利要求3的方法，其中的酶法脱酰胺过程通过将底物经过一种肽聚谷氨酰胺酶的作用来进行。

8.如权利要求7的方法，其中的肽聚谷氨酰胺酶是肽聚谷氨酰胺酶I(肽酰谷氨酰胺酶；EC3.5.1.43)或肽聚谷氨酰胺酶II(蛋白质谷氨酰胺谷氨酰胺酶；EC3.5.1.44)或其混合物。

9.如权利要求7或8的方法，其中的肽聚谷氨酰胺酶源自曲霉属的菌株，特别是日本曲霉，芽孢杆菌属的菌株，特别是环状芽孢杆菌，隐球酵母属的菌株，特别是Cryptococcus albidus，或德巴利酵母属的菌株，特别是克洛德巴利酵母菌。

10.如权利要求7-9中任一项的方法，其中的肽聚谷氨酰胺酶以范围从约0.01到约100.000的PG酶单位每100g底物的量，特别是以约0.1到约10.000PG酶单位每100g底物的量加入到底物中。

11.如权利要求1-10中任一项的方法，其中特异性作用蛋白水解酶是一种内肽酶，如：

(i)一种赖氨酰内肽酶(EC3.4.21.50)；

(ii)一种亮氨酰内肽酶(EC3.4.21.57)；

(iii)一种甘氨酰内肽酶(EC3.4.22.25)；

(iv)一种脯氨酰内肽酶(EC3.4.21.26)；

(v)胰蛋白酶(EC3.4.21.4)或一种胰蛋白酶样内肽酶；或

(vi)一种肽酰天冬氨酸金属内肽酶(EC 3.4.24.33)。

12.如权利要求11的方法，其中(i)的赖氨酰内肽酶是源自无色杆菌属的菌株，特别是水解无色杆菌，溶杆菌属的菌株，特别是产酶溶杆菌，或是假单胞菌属的菌株，特别是铜绿假单胞菌。

13.如权利要求11的方法，其中(iii)的甘氨酰内肽酶源自番木瓜属植物(Carica papaya)。

14.如权利要求11的方法，其中(iv)的脯氨酰内肽酶源自黄杆菌属的菌株。

15.如权利要求11的方法，其中(v)的胰蛋白酶样内肽酶源自镰孢霉属的菌株，特别是尖镰孢霉。

16.如权利要求11的方法，其中(vi)的肽酰天冬氨酸金属内肽酶(EC3.4.24.33)源自假单胞菌属的菌株，特别是霉实假单胞菌。

17.如权利要求1-15项中任一项的方法，其中的特异性作用蛋白水解酶是一种外肽酶。

18.如权利要求16的方法，其中的外肽酶是一种氨肽酶，如：

(i)一种亮氨酰氨肽酶(EC 3.4.11.1)；或

(ii)一种三肽氨肽酶(EC 3.4.11.4)。