[发明专利]抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺

权利要求书

1、一种抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺，其特征在于首先确立以分离纯化的超强毒，应用短程免疫技术及细胞杂交融合构建分泌抗病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并建立以Fibra-Cel为载体，进一步应用细胞反应器规模培养杂交瘤细胞、高效表达单抗的基础培养条件、系统参数及灌注培养模式，最后确定单克隆抗体规模纯化的具体参数。

2、根据权利要求1所述的这种抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺，其特征还在于该病毒，收集含病毒的相应条带，用0.01M的TNE(pH7.2)透析，用福林-酚法测定病毒含量，用电镜观察病毒形态。

3、根据权利要求1所述的这种抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺，其特征还在于构建杂交瘤细胞，获得数株高表达单克隆抗体的杂交瘤细胞，进一步进行染色体鉴定、抗体亚型测定、抗体的特异性测定、抗体的亲和力测定以及中和抗体的鉴定与中和指数测定等，经传30代稳定后，作为细胞株保存。

4、根据权利要求1所述的这种抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺，其特征还在于单克隆抗体的规模生产，首先应用细胞瓶进行杂交瘤细胞体外的小量培养，制备种子细胞，所用培养基为含8％小牛血清的1640，然后转入1.5升的动物细胞反应器进一步增殖种子细胞，待其生长到一定的密度，再转入5升的动物细胞反应器进行规模培养，细胞反应器经过改良，应用Fibra-cel载体进行杂交瘤细胞的培养，该载体为细胞定居和生长提供了很大的空间。

5、根据权利要求1或4所述的这种抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺，其特征还在于动物细胞反应器规模培养杂交瘤细胞的基础培养条件和系统参数为：接种浓度为3.0×10⁸个/升、pH7.0、溶氧55、转速50RPM、温度37℃、葡萄糖浓度为4.5克/升，当糖含量下降到2克/升浓度，进行灌注生产，灌注速度通过测定罐中的葡萄糖的消耗水平进行调节，即可获得较高滴度的单克隆抗体的粗制品。

6、根据权利要求1所述的这种抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺，其特征还在于单克隆抗体纯化工艺，将粗制品经2500rpm，4℃离心30分钟，弃除细胞碎片等杂质，取一份上清加2份0.06M pH4.8醋酸缓冲液，加33μl/ml上清的辛酸，室温下边加边搅拌，加完后室温下静置30分钟，15000rpm，4℃离心30分钟，取上清于pH7.4，0.01M PBS中透析，透析后，加入等体积的饱和硫酸铵沉淀免疫球蛋白，35000rpm，4℃离心20分钟，用pH7.4，0.01M PBS悬浮沉淀，并用pH7.4，0.01M PBS透析，即获得单克隆抗体的纯品。