[发明专利]蚯蚓纤溶酶的提取方法无效
| 申请号： | 01127607.X | 申请日： | 2001-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN1332243A | 公开（公告）日： | 2002-01-23 |
| 发明（设计）人： | 徐凤彩;高向阳;伍晓斌;詹福建 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/76 | 分类号： | C12N9/76 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 510642 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蚯蚓 纤溶酶 提取 方法 | ||
1.蚯蚓纤溶酶的提取方法，其特征在于：
(1)以环毛蚓为原料，将原料用水冲洗干净；
(2)原料匀浆：按1∶2(W/V)的比例加入0.1mol/L，pH7.5的磷酸缓冲液，匀浆；
(3)抽提：将匀浆置于4℃下，将环毛蚓中的纤溶酶提取完全，4℃下10000r/min离心，弃沉淀，取上清；
(4)热变性：将上清液于55℃水浴保温30min，冷却后，离心，取上清；
(5)分部盐析：在热变性的上清液中加(NH4)2SO4达30％饱和度，4℃下10000r/min离心，收集上清夜；再加入(NH4)2SO4达70％饱和度，4℃下10000r/min离心，收集沉淀；
(6)将沉淀溶于pH7.8，0.02mol/L的磷酸缓冲液中，透析时间为8～14小时除去酶液中的(NH4)2SO4后，于4℃下10000r/min离心，取上清液即为粗酶溶液；
(7)Sephadex G-75柱层析洗脱，将粗酶溶液过Sephadex G-75柱层析，以pH7.8，0.02mol/L的磷酸缓冲液洗脱，收集活性峰酶液，
(8)DEAE-Cellulose离子交换柱层析，将过Sephadex G-75的活性峰洗脱液上DEAE-Cellulose柱，以含0.1-0.6mol/L NaCl的pH7.8，0.02mol/L的磷酸缓冲液离子强度线性梯度洗脱，收集活性峰，透析除去酶液中的NaCl后，于4℃下10000r/min离心，收集上清液即为纯化酶溶液。
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