[发明专利]肝靶向重组PEGFP－ATK质粒纳米粒制剂

权利要求书

1.一种肝靶向重组p^EGFP-ATK质粒纳米粒制剂，其特征在于以质粒p^UC-AFPlb，p^EGFP和P^NGVL-TK为原料，先用常规法大抽三种质粒，然后分别用限制性内切酶HindIII和EcoRI消化P^UC-AFPlb分离纯化得800bp的AFP-Alb增强子-启动子片段，用限制性内切酶HindIII-SmaI消化P^NGVL-TK，分离纯化得1125bp的TK片段，用限制性内切酶HindIII-SmaI消化真核表达载体p^EGFP，分离纯化得线性化载体片段，然后将该消化载体片段与AFP-Alb启动子片段进行5′端定向连接，酚抽提，乙醇沉淀后再用此连接产物与HindIII-SmaI消化TK片段进行3′端定向连接，再次酚抽提，纯化，然后用绿豆芽核酸酶MB处理5′突出端后，再进行平端连接，得重组质粒，将聚酯载体，吐温80用有机溶剂溶解，再加入上述重组质粒，匀化后加入聚乙烯醇溶液，再次匀化，所得产物搅拌后冷冻干燥而制成。

2.根据权利要求1所述的纳米粒制剂，其特征在于质粒p^UC-AFPlb，p^EGFP和p^NGVL-TK＝1∶1∶1分子比。

3.根据权利要求1所述的纳米粒制剂，其特征在于匀化用旋涡混合器或探头超声仪或细胞粉碎机，搅拌用搅拌器。

4.根据权利要求1所述的纳米粒制剂，其特征在于聚酯载体为50～200毫克，吐温为10～100毫克，有机溶剂为1～5毫升，重组质粒为50～200毫克，聚乙烯醇溶液浓度为3～9％。

5.根据权利要求1所述的纳米粒制剂，其特征在于聚乙烯醇溶液中溶解了二氯化钙，二氯化钙的溶解浓度为0.5～1.5％。

6.根据权利要求1所述的纳米粒制剂，，其特征在于用探头式超声仪或细胞粉碎机匀化，第一次匀化时再为3～7秒，第2次匀化时间为3～7秒，所得产物用磁力搅拌器搅拌4-6小时。    

7.根据权利要求1所述的纳米粒制剂，其特征在于用旋涡混合器匀化，第一次匀化时间为2-4分钟，第二次匀化时间为1-3分钟，所得产物用磁力搅拌器搅拌4-6小时。