[发明专利]蝎抗心律失常肽重组大肠杆菌及其构建方法无效
| 申请号： | 02115488.0 | 申请日： | 2002-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN1379087A | 公开（公告）日： | 2002-11-13 |
| 发明（设计）人： | 李文鑫;彭方;曾宪春;何小华;朱顺义 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/09;C12P21/02 |
| 代理公司： | 武汉科宏专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430072*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 心律失常 重组 大肠杆菌 及其 构建 方法 | ||
1、一种蝎抗心律失常肽重组大肠杆菌，Escherichia coli BL21(pGEX/BmKIM)CCTCC NO：M201046。
2、一种实现权利要求1所述的蝎抗心律失常肽重组大肠杆菌的构建方法。
其步骤是：
A、从构建的蝎毒腺cDNA文库中筛选到与抗神经兴奋肽基因相似的cDNA序列，在推导的氨基酸序列中，其信号肽区有三个氨基酸的差别，称其为蝎抗心律失常肽基因，根据蝎抗心律失常肽基因序列设计上游和下游引物进行PCR扩增，获得含有有限制性内切酶酶切位点序列的蝎抗心律失常肽的基因或基因片段；
B、用限制性内切酶对回收的PCR产物和表达载体pGEX-5x-1质粒分别进行酶切；
C、用T4DNA连接酶连接酶切后的蝎抗心律失常肽基因和表达载体，构建重组表达载体；
D、制备大肠杆菌BL21感受态，将连接产物转化入大肠杆菌BL21中，得到的克隆子通过PCR鉴定后对插入片段进行测序，为蝎抗心律失常肽重组大肠杆菌。
3、根据权利要求2所述的一种蝎抗心律失常肽重组大肠杆菌的构建方法，其特征是： PCR上游引物 A1，5’-GCCGGATCCCCGATGACGATGACAAGGATGGATATATAAGA-3’，该引物含有BamHI 限制性内切酶酶切位点和小肠激酶酶切位点； PCR下游引物 A2，5’-GCCCTCGAGTCAACCGCATGTATTACTTTCAG-3’该引物含有XohI限制性内 切酶酶切位点；
4、根据权利要求2所述的一种蝎抗心律失常肽重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于蝎抗心律失常肽的cDNA序列为：
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