[发明专利]蛋黄抗癌抗体制备方法及其应用

权利要求书

1、一种蛋黄抗癌抗体的制备方法，其特征在于：以产蛋禽类尤其是鸡作为免疫反应器，用一种或多种纯化的或采用基因工程技术重组的肿瘤特异性抗原或疫苗瘤苗或肿瘤特异性DNA或mRNA及其与之相应载体组成的重组体或针对于肿瘤特异性抗原的单克隆或多克隆抗体或肿瘤组织细胞或上述肿瘤免疫原的脂质体复合物作为免疫原，分别单独进行或多种联合进行禽类尤其是鸡的多次重复免疫注射，然后再以不完全佐剂进行追加强化反应，待5-20天后禽类尤其是鸡的产蛋中即有针对于上述肿瘤免疫原的多克隆抗癌抗体IgY或抗独特型抗体或肿瘤特异性表达抗原中的任一种或其组合物存在和储存。其具体步骤包括：

a)肿瘤免疫原或其组合物进行多次免疫注射禽类优选为鸡。在此所述的肿瘤免疫原是通过纯化的人类肿瘤抗原或通过灭活的肿瘤细胞或组织、通过基因工程技术重组的肿瘤特异性抗原或疫苗瘤苗、通过提取纯化的肿瘤特异性裸DNA或mRNA及其与相应载体组成的重组体、肿瘤特异性抗原的单克隆或多克隆抗体，另外还包括上述肿瘤免疫原的脂质体微粒甚至是纳米微粒；所述禽类包括鸡、鸭、鹅、鹌鹑，首选是鸡；注射部位包括肌肉、皮下、皮内、血管和生殖腔囊；注射方法包括将上述肿瘤免疫原单独进行注射和多种免疫原联合进行多次重复免疫注射，其中所述的多种肿瘤免疫原联合进行免疫注射包括用不同种类和来源的肿瘤抗原、基因重组肿瘤特异性抗原或疫苗瘤苗、肿瘤特异性裸DNA或mRNA及其重组体中的任一种及其组合物；还包括不同种类和来源的肿瘤特异性单克隆或多克隆抗体中的任一种及其组合物；所述的免疫原注射量为1-2ml(免疫原量10-500μg/ml+等量不完全福氏佐剂，其中抗体Ab1的用量为100～2000μg/ml+等量不完全福氏佐剂)。

b)上述肿瘤免疫原用不完全佐剂进行追加免疫反应。

c)待5-20天后禽类尤其是鸡的产蛋中即有针对于上述肿瘤免疫原的蛋黄抗癌抗体存在和储存。其中所述的蛋黄抗癌抗体包括针对于上述人类肿瘤抗原、细胞或组织、重组肿瘤抗原或疫苗瘤苗或其脂质体或纳米微粒的蛋黄多克隆抗癌抗体IgY中的任一种或其组合物；针对于肿瘤特异性裸DNA或mRNA及其重组体或其脂质体或纳米微粒的肿瘤特异性表达抗原中的任一种或其组合物；针对于肿瘤特异性单克隆或多克隆抗体或上述蛋黄多克隆抗癌抗体IgY或其脂质体或纳米微粒的抗独特型抗体Ab2α和Ab2β中的任一种或其组合物。

2、根据权利要求1所述的一种蛋黄抗癌抗体的制备方法，其特征还在于：上述蛋黄抗癌抗体的提取纯化方法是采用水稀释法、反复冻融法或硫酸铵、硫酸钠、PEG或辛酸沉淀或浸提、萃取、浓缩、膜过滤的的方法从上述禽类尤其是鸡蛋黄中提取纯化针对于上述肿瘤免疫原的多克隆抗癌抗体IgY或抗独特型抗体或肿瘤特异性表达抗原中的任一种或其组合物，然后将该纯化的蛋黄抗癌抗体添加相应辅料包括海藻糖而制备成药剂学上的任意剂型包括片剂、针剂、口服液和喷雾剂。其具体步骤包括：

a)取禽蛋尤其是鸡蛋去壳取黄，除去粘附于蛋黄膜上的蛋白组分，然后将蛋黄置于灭菌蒸馏水中，反复洗涤三次，进一步除去蛋黄膜上的蛋白组分，沥干后刺破蛋黄膜，收集蛋黄。

b)将上述收集蛋黄充分搅拌均匀后，加入蛋黄匀浆5倍体积的0.1mol/L PH7.2磷酸盐-海藻糖稀释液，制成稀释蛋黄液。在该稀释蛋黄液中海藻糖的重量百分比是5-30％。

c)将上述稀释蛋黄液置于冰盒(-20℃)冰冻1-5小时，然后取出于室温复融并低速离心(500-1000r/min)后沥出收集上清液，然后再向沉淀物中加入2-5倍体积的0.1mol/L PH7.2磷酸盐-海藻糖稀释液，充分混匀溶解沉淀物，依上法再次冻融收集上清液，如此反复冻融3-5次，合并收集各次得到的上清液备用。

d)向上述收集上清液中按比例加入硫酸铵、硫酸钠、PEG、硫酸葡聚糖、藻酸钠或辛酸沉淀剂中的任一种或其复合物，离心收集其沉淀物，该沉淀物中即含有针对于上述肿瘤免疫原的多克隆抗癌抗体IgY或抗独特型抗体或肿瘤特异性表达抗原中的任一种或其组合物。

e)将上述沉淀物用蒸馏水复溶后透析或超滤浓缩或凝胶层析，进一步纯化针对于上述肿瘤免疫原的多克隆抗癌抗体IgY或抗独特型抗体或肿瘤特异性表达抗原中的任一种或其组合物。

f)向上述纯化的蛋黄抗癌抗体按比例添加相应辅料，将其制备成药剂学上的任意剂型包括片剂、针剂、口服液和喷雾剂。在此所述的辅料包括海藻糖。