[发明专利]蛋黄抗癌抗体制备方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种蛋黄抗癌抗体制备方法，另外还涉及该蛋黄抗癌抗体的用途。

抗癌抗体的制备对肿瘤的诊断、治疗和预防具有非常重要的意义，因而受到国内外生物医学界的广泛关注，已开展了大量的工作并取得了较大的进展。在现有技术中多采用单克隆抗癌抗体应用于恶性肿瘤的诊断和生物治疗，其中单克隆抗癌抗体的制备方法一般包括获取癌细胞相关抗原、免疫小鼠和融合杂交瘤三个步骤，亦即a首先利用生化和免疫化学的方法获取携带有癌细胞相关信息的癌细胞相关抗原，b然后将该癌细胞相关抗原多次重复注射入小鼠体内，待小鼠发生特异性免疫反应一定时间后，取出其脾脏并分离出带有癌细胞相关抗原信息的致敏淋巴细胞，再将该致敏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，再筛选出针对于癌细胞相关抗原的阳性杂交瘤细胞进行体外扩增或接种于小鼠腹腔内，即可从培养上清液或小鼠腹水中获得所需的单克隆抗癌抗体。

上述单克隆抗体(简称单抗)或多单克隆抗体(简称多抗)作为癌症(亦称为恶性肿瘤)诊断剂或检测剂，近年来已在医学和生物学领域得到广泛应用。该类方法的原理是基于单抗或多抗对相应肿瘤抗原的高特异性识别能力而设计的，结合以相应的标记物(酶标、金标、荧光、发光和放射性标记等)而显示肿瘤抗原的存在与否及其量的多少。

单抗作为治疗剂的研究也于近年获得重要进展。单抗药物(monoclonal antibodyagents)可应用于治疗肿瘤、病毒性感染、心血管病以及其它疾患，尤其是用于肿瘤治疗，已显示出良好的前景。抗肿瘤抗体药物一般包括两类，一是抗肿瘤单抗或多抗；二是抗肿瘤单抗或多抗偶联物，或称免疫偶联物(immunoconjugate)。免疫偶联物分子由单抗或多抗与“弹头”药物两部分构成，故称为导向药物，又称为生物导弹或“魔弹”(magic bullets)，与之相对应的治疗方法称为导向治疗。单抗或多抗所针对的靶标通常为肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原或特定的受体。用作“弹头”的物质主要有三类，即放射性核素、药物和毒素，其与单抗或多抗连接分别构成放射免疫偶联物、化学免疫偶联物和免疫毒素。自80年代以来对抗肿瘤单抗药物进行了大量研究，特别是自1997年以来，Rituxan、Herceptin在美国相继获批准用于临床肿瘤治疗，单抗药物的研究与开发有了新的发展势头，成为生物技术药物的新热点(甄永苏，单克隆抗体药物治疗肿瘤的研究现状与展望，中国医学科学院学报，2000，22：9-12)。

尽管单抗药物的临床研究结果已为其应用于治疗肿瘤展示出良好的前景，但仍有许多问题需要进一步研究解决(Nguyen DT，Amess JA，Doughty H，et al.IDEC-C2B8anti-CD20(rituximab)im munotherapy in patients with low-grade non-Hodgkin′slymphoma and lymphoproli ferative disorders：evaluation of response on 48 patients.Eur JHaematol，1999，62：76-82)。单抗药物存在的问题主要涉及免疫学和药理学两方面。免疫学方面的问题关键是人抗鼠Ig抗体(HAMA)反应，因为多年来用于临床研究的单抗药物多数使用小鼠单抗制备，往往导致HAMA反应。此外，肿瘤细胞群体在抗原性方面的异质性，肿瘤细胞的抗原性调变等也能影响单抗药物的疗效。药理学方面的问题主要是到达肿瘤的药量不足。单抗药物在体内运送过程中受多种因素影响。由于它是异体蛋白，会被网状内皮系统摄取，有相当数量将积聚于肝、脾和骨髓；再者就是机体对该异体蛋白产生抗体而降低其效力。单抗药物是大分子物质，通过毛细血管内皮层以及穿透肿瘤细胞外间隙均受到限制。(甄永苏，单克隆抗体药物治疗肿瘤的研究现状与展望，中国医学科学院学报，2000，22：9-12)。