[发明专利]通过阳离子交换层析纯化药物活性蛋白的方法

权利要求书

1.一种用于纯化药物活性蛋白的方法，该方法包括下列步骤：在比相当于所纯化蛋白质等电点pI的pH更具碱性的pH下的固体基质上进行阳离子交换层析，所述蛋白质在该pH下仍然保持被吸附；并通过提高洗脱剂的离子强度和/或pH来洗脱所述蛋白质。

2.一种根据权利要求1的方法，其特征在于用于阳离子交换层析的洗脱剂由pH在2-11的缓冲水溶液制成。

3.一种根据权利要求2的方法，其特征在于所述缓冲水溶液的pH在4-8.5的范围。

4.一种根据权利要求2和3的方法，其特征在于所述的缓冲水溶液含有5-100mM的下列缓冲液混合物：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠、邻苯二甲酸一钾和氢氧化钠、柠檬酸二钠和氢氧化钠、柠檬酸和磷酸氢二钠、咪唑和盐酸。

5.一种根据权利要求2-4的方法，其特征在于所述的缓冲溶液可以含有1-100mM的用于改变该溶液离子强度的有机或无机盐。

6.一种根据权利要求1的方法，其特征在于所述的药物活性蛋白是干扰素和白蛋白。

7.一种根据权利要求6的方法，其特征在于所述的干扰素蛋白质是α、β、δ、γ、ω、σ干扰素、来自白细胞的天然α干扰素、重组α-2b干扰素和公认干扰素；且所述的白蛋白是天然和重组人白蛋白。

8.一种用于纯化重组α-2b干扰素即rIFNα-2b的方法，该方法包括下列步骤：将来源于通过对与1M乙酸钠溶液一起添加并用乙酸使pH达到5.5的rIFNα-2b发酵生产的蛋白质混合物上填充了强阳离子交换树脂的用20mM乙酸钠溶液将pH调节为5.5的柱，使得每ml固定相中含有6-8mg的蛋白质，对该柱进行两次洗涤循环，第一次使用浓度为5-15mM、pH为6.1的缓冲溶液，然后使用添加有2mM氯化钾的相同缓冲溶液，且最后通过使用含有浓度为15-25mM氯化钾的5-15mM浓度、pH6.1的缓冲溶液从该柱上洗脱下纯的rIFNα-2b。

9.一种根据权利要求8的方法，其特征在于所用的树脂是Mustang^S且所述的缓冲液混合物选自那些由磷酸二氢钾和磷酸氢二钠、邻苯二甲酸一钾和氢氧化钠、柠檬酸二钠和氢氧化钠、柠檬酸和磷酸氢二钠、咪唑和盐酸制成的缓冲液混合物。

10.一种用于纯化人血清白蛋白的方法，该方法包括下列步骤：将含有用柠檬酸将pH调节为3的人血清白蛋白的溶液上填充了强阳离子交换树脂的用20mM柠檬酸溶液将pH调节为3的柱，使得每ml固定相中含有6-8mg的蛋白质，使用随后将pH值调节至5.5-5.8的20mM乙酸钠溶液对该柱进行两次洗涤循环，且然后使用由磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合物制成的浓度为5-100mM、pH为6.0的缓冲溶液从该柱上洗脱下纯的人血清白蛋白。

11.上述权利要求中任意一项的方法用于生产基于药物活性蛋白的药物制品中包含的活性成分的用途。

12.根据权利要求11的用途，其特征在于所述的活性成分是干扰素蛋白质。

13.根据权利要求12的用途，其特征在于所述的干扰素蛋白质是重组α-2b干扰素。

14.根据权利要求11的用途，其特征在于所述的活性成分是白蛋白。

15.根据权利要求14的用途，其特征在于所述的白蛋白是天然或重组人血清白蛋白。