[其他]由原生质体再生稻株的方法

权利要求书

1、一种形成水稻植株的方法，其特征在于包括下述步骤：

第一步是在MS、B5，N6或R2琼脂培养基中培养水稻种子的胚、盾片或胚根，再由水稻种子的胚、盾片或胚根衍生出第一个愈伤组织，而其中每种培养基中含有（1）0.01-1%（重）的酵母抽提物，0.01-1%（重）的麦芽汁，0.01-1%（重）的酪蛋白水解物，或5-20%（重）的马铃薯抽提物，（2）0.1-10mg/l的2，4-D，以及（3）0-5mg/l的苄基腺嘌呤0-5mg/l的激动素，

第二步是将第一个愈伤组织在R2，N6或MS培养基中培养成易释放出原生质体的细胞团，而其中每种培养基中含有（1）0.1-1%（重）的酵母抽提物，0.1-1%（重）的麦芽汁，0.1-1%（重）的酪蛋白水解物，或5-20%（重）的马铃薯抽提物，（2）0.1-10mg/l的2，4-D以及（3）0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素，培养基中的细胞浓度为0.3-3%（重），

第三步是用释放原生质体的酶溶液处理细胞团以释放出原生质体，而所述的酶溶液含有0.1-10%（重）的纤维素酶，0.1-5%（重）的浸解酶，0-5%（重）的氯化钙，0-5%（重）的葡聚糖硫酸酯的钾盐，以及3-15%（重）甘露糖醇，

第四步是在条件培养基中培养所述的原生质体，以培养出第二个愈伤组织，而所述的条件培养基是由第二步所用的培养基得到，并且放在含有渗压剂的亲水支持体层上，亲水支持体层上条件培养基的厚度为200-300μm，

第五步是将所述的第二个愈伤组织在分化培养基中培养，以再生出水稻植株，而所述的培养基是MS培养基，它含有0.1-1%（重）的酵母抽提物，0.1-1%（重）的麦芽汁，0.1-1%（重）的酪蛋白水解物或5-20%（重）的马铃薯抽提物，（2）0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。

2、根据权利要求1所述的方法，其中以继代培养方式培养胚、盾片或胚根。

3、根据权利要求1所述的方法，其中以继代培养的方式培养第一个愈伤组织。

4、根据权利要求1所述的方法，其中条件培养基的渗透作用用蔗糖调节，pH不大于5.2。

5、根据权利要求1所述的方法，其中亲水支持体采用琼脂、藻酸或明胶。

6、根据权利要求1所述的方法，其中水稻是稻（Oryza sativa）。

7、根据权利要求1所述的方法，其中第五步骤还包括在第二个愈伤组织在分化培养基中培养之前，先将它放在MS、B5、N6或R2培养基中生长，上述各培养基含有（1）0.1-1%（重）的酵母抽提物，0.1-1%（重）的麦芽汁，0.1-1%（重）的酪蛋白水解物，或5-20%（重）的马铃薯抽提物，（2）0.1-10mg/l的2，4-D，以及（3）0-5mg/l的苄基腺嘌呤或0-5mg/l的激动素。