[其他]由原生质体再生稻株的方法

说明书

由原生质体生成完全的水稻植株的方法。为得到此原生质体，由稻种的坯、盾片或坯根衍生出愈伤组织，在液体培养基中培养愈伤组织以形成易放出原生质体的细胞团。用原生质体释放酶溶液处理细胞团以得到原生质体。然后将原生质体培养成愈伤组织，再在分化培养基中培养此愈伤组织，再生出整株稻。

本发明涉及一种用所谓原生质体法形成稻株的方法。更确切地说，本发明涉及一种由原生质体衍生出愈伤组织，再由它再生出稻株的方法，原生质体则来自于由稻种的胚、盾片或胚根产生的愈伤组织。

原生质体是植物、细菌、真菌之类的除去了细胞壁的细胞。因为原生质体没有细胞壁，故易于经受人工处理，例如细胞融合、基因控制、以及人为的体细胞突变等。于是，如果能由所处理的原生质体再生出一个完整的植株，则可能获得一种植物，它具有野生植物所没有的优点。作为发展这种所谓的原生质体法的第一步，对于所要研究的每个具体的有机体，都必须建立能够由原生质体再生出完整植株的方法。

对于双子叶植物，例如烟草，已知有一些方法可用来从原生质体中再生出完整的植株。在这方面常用的方法包括将原生质体埋置在半固态的琼脂培养基中、悬在液体培养基中、或利用喂养细胞培养等各种培养原生质体的方法。但是已经发现这些方法对于水稻原生质体的培养是无效的，如果用上述常规方法之一进行水稻原生质体的培养，原生质体不是死掉就是不能生长。

关于水稻原生物体的培养技术已有报导，由缺乏硝酸还原酶的细胞得到的原生质体衍生出愈伤组织（Wakasa et al.，J.plant physiol.117：pp.223-231，1984）。还有报导说，由花粉的愈伤组织得到的原生质体衍生出愈伤组织，从它产生出苗（ohno et al.，Japanese Journal of Breeding35：pp.54-55，1985）。但是还未曾有从水稻原生质体中再生出完整稻株的报导。

另一方面，很多研究者报导过，由水稻的培养细胞再生出完整植株（Nishi et al.，Nature 219：pp.508-509，1968）。但是，这些方法没有利用原生质体。另外还发现，用这些方法由具有高度分化能力的细胞很难得到原生质体。而且原生质体难以培养。

于是，如果建立起一种能由原生质体再生出完整水稻植株的方法，关于创造具有优异性能的水稻品种的研究就会前进一大步。

因此，本发明的目的是提供一种能够由原生质体再生出完整稻株[稻属作物，例如亚洲稻（Oryza sativa）、非洲稻（Oryza glaberrima）、多年生稻（Oryza perennis）等等]的方法。

在本发明的方法中，由水稻种子的胚、盾片或胚根中衍生出第一个愈伤组织，然后将其在液体培养基中培养，形成易于释放出原生质的细胞团。此细胞团用释放原生质的酶溶液处理以形成原生质体。将原生质体培养成第二个愈伤组织，在分化培养基中培养，再生出完整的植株。

利用本发明，第一次由原生质体再生出一个完整的稻株（属于稻属，例如亚洲稻、非洲稻、多年生稻等等）。