[发明专利]生产分泌性三聚受体类似物和生物活性融合蛋白的方法与组合物

权利要求书

1.一种产生分泌三聚融合蛋白的方法，其包含：

(a)构建包含连接到编码信号肽序列的模板的转录启动子的DNA构建物，所述信号肽序列框内融合到待三聚化的多肽，所述待三聚化的多肽又框内连接到能够自身三聚化的多肽，所述多肽与待三聚化的第一多肽异源(heterologous)；(b)将所述DNA构建物引入真核细胞内；(c)在生理条件下在适当的培养基中生长所述宿主细胞，使得可以分泌由所述DNA序列编码的三聚融合体蛋白；(d)从所述宿主细胞的培养基分离所述三聚化融合蛋白。

2.根据权利要求1的方法，其中所述三聚化多肽融合体是同型三聚体。

3.根据权利要求1的方法，其中所述三聚化多肽部分包含能够自组装为三聚体的胶原C末端部分，所述胶原C末端部分选自pro.α.1(I)、pro.α.2(I)、pro.α.1(II)、pro.α.1(III)、pro.α.1(V)、pro.α.2(V)、pro.α.1(XI)、pro.α.2(XI)和pro.α.3(XI)。

4.一种产生分泌性三聚融合蛋白的方法，所述方法包括：

(a)向真核宿主细胞内引入包含驱动开放读码框转录的启动子的第一DNA构建物，所述开放读码框由框内连接到待三聚化的非胶原多肽的信号肽序列组成，而所述信号肽序列又框内连接能够自身三聚化的胶原C-末端部分，所述胶原C-末端部分选自pro.α.1(I)、pro.α.2(I)、pro.α.1(II)、pro.α.1(III)、pro.α.1(V)、pro.α.2(V)、pro.α.1(XI)、pro.α.2(XI)和pro.α.3(XI)；(b)向真核宿主细胞内引入包含驱动开放读码框转录的启动子的第二DNA构建物，所述开放读码框由框内连接到待三聚化的第二非胶原多肽的第二信号肽序列组成，而所述第二信号肽序列又框内连接能够自身三聚化的第二胶原C-末端部分，所述第二胶原C-末端部分选自pro.α.1(I)、pro.α.2(I)、pro.α.1(II)、pro.α.1(III)、pro.α.1(V)、pro.α.2(V)、pro.α.1(XI)、pro.α.2(XI)和pro.α.3(XI)；(c)在生理条件下在适当的生长培养基中生长所述宿主细胞，使得可以分泌由所述第一与第二DNA序列编码的三聚融合蛋白；和(d)从所述宿主细胞分离所述分泌性三聚融合蛋白。

5.一种产生分泌性三聚融合蛋白的方法，所述方法包括：

(a)向真核宿主细胞内引入包含驱动开放读码框转录的启动子的第一DNA构建物，所述开放读码框由框内连接到待三聚化的非胶原多肽的信号肽序列组成，而所述信号肽序列又框内连接能够自身三聚化的胶原C-末端部分，所述胶原C-末端部分选自pro.α.1(I)、pro.α.2(I)、pro.α.1(II)、pro.α.1(III)、pro.α.1(V)、pro.α.2(V)、pro.α.1(XI)、pro.α.2(XI)和pro.α.3(XI)；(b)向真核宿主细胞内引入包含驱动开放读码框转录的启动子的第二DNA构建物，所述开放读码框由框内连接到待三聚化的第二非胶原多肽的第二信号肽序列组成，而所述第二信号肽序列又框内连接能够自身三聚化的第二胶原C-末端部分，所述第二胶原C-末端部分选自pro.α.1(I)、pro.α.2(I)、pro.α.1(II)、pro.α.1(III)、pro.α.1(V)、pro.α.2(V)、pro.α.1(XI)、pro.α.2(XI)和pro.α.3(XI)；(α)向真核宿主细胞内引入包含驱动开放读码框转录的启动子的第三DNA构建物，所述开放读码框由框内连接到待三聚化的第三非胶原多肽的第三信号肽序列组成，而所述第三信号肽序列又框内连接能够自身三聚化的胶原的第三C-末端部分，所述第三胶原C-末端部分选自pro.α.1(I)、pro.α.2(I)、pro.α.1(II)、pro.α.1(III)、pro.α.1(V)、pro.α.2(V)、pro.α.1(XI)、pro.α.2(XI)和pro.α.3(XI)；(d)在生理条件下在适当的生长培养基中生长所述宿主细胞，使得可以分泌由所述第一与第二DNA序列编码的三聚融合蛋白；和(e)从所述宿主细胞分离所述分泌性三聚融合蛋白。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其中所述信号肽序列和所述待三聚化的非胶原多肽均来源于相同的天然分泌性蛋白。