[发明专利]在宿主细胞中表达基因的黑曲霉启动子

说明书

                       发明背景

发明领域

本发明涉及分离的启动子以及涉及包括所述启动子的核酸构建 物和载体。本发明也涉及在宿主细胞中表达目标编码序列的方法。

相关技术领域的描述

分子生物技术是基于研究人员这样的能力的学科，即将遗传信 息的特定单元从一个生物体转移到另一个生物体的能力，其目标是产 生商业化相应量的有用产物。这个克隆过程的目标之一是获得克隆基 因的最大表达。通过构建适于用在宿主细胞中的表达载体，进行由基 因编码的产物的重组产生，在所述宿主细胞中，编码期望产物的核酸 被置于启动子的表达调控下。通过多种技术例如转化，将表达载体引 入宿主细胞中，然后，通过在合适的条件下培养转化的细胞，获得期 望产物的产生，所述条件对于包括在所述表达载体内的启动子起作用 是必要的。

尽管众多启动子在本领域中是已知的，仍存在对调控异源基因 和编码序列表达的新启动子的需求。本发明描述了用于在宿主细胞例 如细菌和真菌细胞中表达基因的新启动子。

发明概述

本发明涉及分离的启动子序列、构建物、载体和宿主细胞，其 包含一种或一种以上可操纵性连接至异源编码序列的启动子序列。

本发明还涉及分离的启动子序列，选自下列：

a)SEQ ID NO：1；

(b)保持启动子活性的SEQ ID NO：1的子序列；

(c)保持启动子活性的SEQ ID NO：2的子序列；

(d)核酸序列，其作为启动子起作用以及在中度、高度或非常高 度的严格条件下与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或它们的子序 列杂交；

(e)包括SEQ ID NO：2或它的子序列的杂合启动子序列；

(f)包括SEQ ID NO：2的串联启动子序列；和

(g)包含母启动子的缺失、取代或插入的变异启动子序列，其中 所述母启动子是SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2。

附图简述

图1示出黑曲霉(Aspergillus niger)A4长启动子(A4-L启动子) (SEQ ID NO：1)的DNA序列、黑曲霉(Aspergillus niger)A4启动子(SEQ ID NO：2)的DNA序列和黑曲霉(Aspergillus niger)A4-5’启动子(SEQ ID NO：3)的DNA序列。

图2是A4-L启动子的图解，其包含两个邻接区(contiguous regions)，毗连群(contig)8165和毗连群9162，其通过ERGO数据库检 索和BLAST数据库检索获得。这些邻接区位于曲霉属(Aspergillus)染色 体的不同区。毗连群8165为3988bp，而毗连群9162为8140bp。A4-L 启动子的起始419bp被发现为从毗连群8165的1214bp至793bp(本 文中称为A4-5’启动子)，(SEQ ID NO：3)。A4-L启动子的第二部分(bp 420至bp 829)(本文中称为A4启动子(SEQ ID NO：2))位于毗连群9162 的3775至3365bp。用于制备两种截短的片段(A4(SEQ ID NO：2)和 A4-5’(SEQ ID NO：3))的限制性位点被示出。

图3表示pSEGCT11AG8载体，其包括：

来源于密苏里游动放线菌(Actinoplanes missouriensis)的葡糖异 构酶启动子，

变铅青链霉菌(S.lividans)纤维素酶celA的信号序列，

编码来自放线菌(Actinomyces)种的纤维素酶11AG8基因的多 核苷酸，

纤维素酶11AG3终止子序列。

图4A-B提供了由葡糖异构酶(GIT)启动子、celA信号序列、 11AG8成熟纤维素酶序列和11AG3终止子组成的表达盒的DNA序列 (SEQ ID NO：4)(图4A)，以及CelA-11AG8的蛋白序列(SEQ ID NO：5) (图4B)。在图4A中，celA信号序列加下划线，而11AG3终止子序列 为斜体。