[发明专利]传感器构建体和检测方法

权利要求书

1.一种方法，用于检测样品中的待分析物，所述方法包括如下步骤：

(a)提供一种传感器构建体，所述传感器构建体包括：

(i)能与所述待分析物特异性结合的分子识别结构域；

(ii)第一标记，包含RET供体；以及

(iii)第二标记，包含针对所述第一标记的所述RET供体的RET受体，所述RET受体与所述RET供体分开使得Frster共振能量转移得以发生的距离，其中，当所述分子识别结构域结合所述待分析物时，所述待分析物与所述RET供体和/或所述RET受体的接近对所述RET供体和所述RET受体之间的FRET相互作用产生干扰；

(b)将所述样品与所述传感器构建体相接触，然后

(c)测量来自所述传感器构建体的光学信号，其中，当检测到对所述RET供体和所述RET受体之间的Frster共振能量转移相互作用的干扰时，则确定所述样品中存在所述待分析物。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述RET受体与所述RET供体分开的距离小于大约25纳米。

3.如权利要求2所述的方法，其包含多个RET供体和RET受体。

4.如权利要求1所述的方法，其中，所述RET供体选自荧光蛋白、发光蛋白、非蛋白荧光团、非蛋白化学发光化合物以及荧光纳米晶体的组。

5.如权利要求4所述的方法，其中，所述供体是选自由GFP、EGFP、RFP、BFP、CFP、ECFP、YFP、EYFP和上述物质衍生物所构成的组的荧光蛋白。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述RET受体选自由荧光蛋白、发光蛋白、非蛋白荧光团、荧光纳米晶体和猝灭剂所构成的组。

7.如权利要求1所述的方法，还包括如下步骤：

在将所述传感器构建体与所述样品接触之前，对所述传感器构建体的所述RET供体和所述RET受体之间的Frster共振能量转移相互作用产生的对照光学信号加以测量；以及

测定所述对照光学信号与步骤(c)中所述光学信号之间的差异，其中，所述对照光学信号与步骤(c)中所述光学信号之间的差异代表所述样品中所述待分析物的含量。

8.如权利要求7所述的方法，其中，对所述对照光学信号与步骤(c)中所述光学信号之间的差异进行的测定包括：对所述传感器构建体的所述荧光或发光的衰减动力学或强度的变化加以测量。

9.如权利要求1所述的方法，其中，所述传感器构建体包含多肽。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述多肽包含抗体的Fv部分，以及所述分子识别结构域包含所述Fv部分的CDR区域。

11.如权利要求10所述的方法，其中，提供传感器构建体的步骤包含，单独提供包含所述分子识别结构域、所述第一标记和所述第二标记的所述多肽。

12.如权利要求11所述的方法，其中，所述第一标记包含接头，其中包含蛋白质A的E结构域；所述第二标记包含蛋白质L的结合结构域。

13.如权利要求1所述的方法，其中，所述分子识别结构域包含螯合的金属。

14.如权利要求1所述的方法，其中，所述分子识别结构域包含寡核苷酸。

15.用于检测待分析物的传感器构建体，其中包含：

(a)能与所述待分析物的表位特异性结合的分子识别结构域；

(b)第一标记，包含RET供体；以及

(c)第二标记，包含针对所述第一标记的所述RET供体的RET受体，所述RET受体与所述RET供体分开使得Frster共振能量转移得以发生的距离，其中，当所述分子识别结构域结合所述待分析物时，所述待分析物的一部分插入到所述RET受体和所述RET供体之间。

16.如权利要求15所述的传感器构建体，其中，所述传感器构建体包含多肽。

17.如权利要求16所述的传感器构建体，其中，所述传感器构建体包含单链Fv(scFv)，并且其中所述分子识别结构域包含所述scFv的CDR区域。

18.如权利要求17所述的传感器构建体，其中，所述第一标记与所述scFv偶联。