[发明专利]检测、鉴定和定量大环内酯及其杂质的方法与系统

权利要求书

1.一种检测测试样品中的大环内酯的方法，其中所述测试样品的主要组分以重量计是所述大环内酯，所述方法包括：

a)将所述测试样品施加到反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；

b)用含有挥发性缓冲液、水、乙腈和醇的梯度流动相洗脱所述测试样品；和

c)用电化学检测器或质谱检测器监测所述柱的流出液，以分别检测对应于所述大环内酯的电流峰或质量峰。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大环内酯是9-(S)-红霉胺。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大环内酯在约180nm到约220nm的紫外-可见范围具有最大吸收。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述挥发性缓冲液是乙酸铵。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的pH为约6到约8。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇包括甲醇。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相含有洗脱液A和洗脱液B的混合物，洗脱液A和洗脱液B的相对含量在洗脱进程中变化，其中洗脱液A基本上由约60到约75mM的水配制的乙酸铵组成，洗脱液B基本上由用以体积计约50到约70％的乙腈和以体积计约30到约50％的甲醇组成的混合物配制的约60到约75mM的乙酸铵组成。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括通过将所述电流峰的面积或高度与参比标准品的电流峰的面积或高度进行比较来定量所述测试样品中所述大环内酯的含量。

9.一种测定测试样品的纯度的方法，其中所述测试样品的主要组分以重量计是大环内酯，所述方法包括：

a)将所述测试样品施加到反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；

b)用含有挥发性缓冲液、水、乙腈和醇的梯度流动相洗脱所述样品；

c)用电化学检测器监测所述柱的流出液，以检测：

i)对应于所述大环内酯的电流峰；和

ii)任选的对应于所述测试样品中的一种或多种杂质的一个或多个其它电流峰；和

d)测定所述检测器所检测的电流峰的一种或多种特性来计算所述测试样品中的杂质含量。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述测定通过以下步骤进行：i)测定每种检测杂质和所述大环内酯的电流峰面积；和ii)计算所述大环内酯引起的总电流峰面积的百分比。

11.一种鉴定测试样品中杂质的方法，其中所述测试样品的主要组分以重量计是大环内酯，所述方法包括：

a)将所述测试样品施加到反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱；

b)用含有挥发性缓冲液、水、乙腈和醇的梯度流动相洗脱所述测试样品；

c)用质谱检测器监测柱的流出液，以检测：

i)对应于所述大环内酯的质量峰；和

ii)对应于所述测试样品中所述杂质的其它质量峰；和

d)测定对应于所述杂质的所述其它质量峰的质量。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述大环内酯是9-(S)-红霉胺。

13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述杂质是大环内酯。

14.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述杂质是：

红霉素B；

红霉素腙B；

9-亚氨基红霉素B；

红霉胺B；

红霉素腙丙酮加合物；

9-羟基亚氨基红霉素；

氢氧化红霉胺；

9-羟基亚氨基红霉素B；

氢氧化红霉胺B；

9-(R)-红霉胺；

红霉胺C；

红霉胺D；或下式所示的化合物；

15.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述杂质是式VI、VII、VIII、IX、X或XI所示的化合物：