[发明专利]调节细胞内和/或细胞外氧化/还原反应的组合物在精子染色或分选方法中的用途

说明书

发明领域

本发明一般地涉及分选染色精子细胞的方法。更具体而言，本发明涉及分选精子细胞的方法，其中形成含有调节细胞内和/或细胞外氧化/还原反应的组合物的精子细胞悬浮液。

发明背景

通过人工授精(AI)使动物受精以及体外受精后的胚胎移植已经是一项成熟的技术。在家畜产业中，能够对繁殖结果施加影响而使其后代具有一种或多种期望特征，有明显的优势。例如，乳制品产业中如能预先选择后代有利于雌性而保证奶牛的产量，则会带来经济效益。将精子分离为富集的带有X和Y染色体的细胞群，即所谓的性别富集精液或性别富集精子，便是达到后代预选目的的方法之一。

为得到性别富集精液，必须将精子细胞以染料染色，然后分选为带有X和Y染色体的细胞。染色和分选过程的每一步对于精子细胞而言都是应激，会导致精子细胞的存活力或运动性，特别是前向性运动性降低。对精子细胞尤其具有压力的是对之染色的过程，该过程中需要将细胞与染料接触一定时间，而且通常是在典型精子细胞环境所不常有的温度和pH条件下。

发明概述

本发明的多方面之一涉及精子悬浮液，所述精子悬浮液可用于如将精子分选为带X或Y染色体的富集精子群的方法。

因此，简言之，本发明涉及这样的染色混合物，其含有活精子、调节细胞内和/或细胞外氧化/还原反应的组合物、以及DNA选择性染料，所述染色混合物中组合物若为丙酮酸盐，则其浓度大于50μM。

本发明还涉及染色精子细胞的方法，所述方法包括形成这样的染色混合物，其含有完整活精子细胞、调节细胞内和/或细胞外氧化/还原反应的组合物、以及DNA选择性染料，所述染色混合物中组合物若为丙酮酸盐，则其浓度大于50μM。

附图简述

图1以图表显示了实施例1中进行研究的结果，其中测量了于41℃TCA缓冲液或含有10mM丙酮酸盐的TCA缓冲液中，用400μM Hoechst33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图2以图表显示了实施例2中进行研究的结果，其中测量了于41℃TCA缓冲液或含有10μM维生素K的TCA缓冲液中，用400μM Hoechst33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图3以图表显示了实施例3中进行研究的结果，其中测量了于41℃TCA缓冲液或含有100μM维生素K的TCA缓冲液中，用400μM Hoechst33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图4以图表显示了实施例4中进行研究的结果，其中测量了于41℃TCA缓冲液或含有1mM硫辛酸的TCA缓冲液中，用400μM Hoechst33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图5以图表显示了实施例5中进行研究的结果，其中测量了于28℃TCA缓冲液或含有10mM丙酮酸盐的TCA缓冲液中，用600μM Hoechst33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图6以图表显示了实施例6中进行研究的结果，其中测量了于28℃TCA缓冲液或含有100μM维生素K的TCA缓冲液中，用600μM Hoechst33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图7以图表显示了实施例7中进行研究的结果，其中测量了于28℃TCA缓冲液或含有1mM硫辛酸的TCA缓冲液中，用600μM Hoechst33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图8以图表显示了实施例8中进行研究的结果，其中测量了于28℃TCA缓冲液、含有2.5mM丙酮酸盐的TCA缓冲液、含有10mM丙酮酸盐的TCA缓冲液、含有25mM丙酮酸盐的TCA缓冲液以及含有50mM丙酮酸盐的TCA缓冲液中，用600μM Hoechst 33342染料染色的精子的前向性运动百分比。

图9以图表显示了实施例9中进行研究的结果，其中测量了于28℃TCA缓冲液或含有10mM丙酮酸盐的TCA缓冲液中，用20μM SYBR-14染料染色的精子的前向性运动百分比。

图10以图表显示了实施例10中进行研究的结果，其中测量了于28℃TCA缓冲液或含有10mM丙酮酸盐的TCA缓冲液中，用100μM BBC染料染色的精子的前向性运动百分比。

图11以图表显示了实施例11中进行研究的结果，其中测量了于28℃TCA缓冲液或含有10mM丙酮酸盐的TCA缓冲液中，用200μM BBC染料染色的精子的前向性运动百分比。