[发明专利]检测多态性蛋白质的表型的方法

说明书

技术领域

本发明提供了与多态性蛋白质(polymorphic protein)的等位基因变体区别性反应的抗体、鉴定所述等位基因变体的方法、其中包含的抗原结合片段、其编码核酸、包含其的蛋白质、细胞、病毒颗粒、组合物以及试剂盒。本发明还提供了用于确定个体的触珠蛋白类型的方法以及测试个体对糖尿病并发症的易感性的方法。

背景技术

位于16q22的触珠蛋白基因座具有多态性，其具有两类已知的等位基因，称为1和2[Langlois M et al，Clin Chem 42：1589-1600，1996]。这种多态性相当普遍，且这两种等位基因的频率在全世界范围内大致相同。多个纵向和横向的人群研究显示，触珠蛋白是发生糖尿病血管并发症的重要易感性基因[Levy A et al，New Eng J Med 343：969-70，2000；RoguinA et al，Am J Card 87：330-2，2001]。与触珠蛋白1等位基因(Hp1)纯合子型的糖尿病者相比，触珠蛋白2等位基因(Hp2)纯合子型的糖尿病者发生心血管疾病的危险性要高5倍，而杂合子型的危险性介于中间[LevyA et al，J Am Coll Card 40：1984-90，2002]。使用Hp1和Hp2等位基因的纯化蛋白产物进行机制研究发现它们在抗氧化和免疫调节活性方面具有深刻的不同[Frank M et al，Blood；98：3693-8，2001；Asleh R et al，Circ Res92：1193-200，2003]。

各种触珠蛋白等位基因蛋白产物之间存在功能和结构上的不同[Langlois M et al，Clin Chem 42：1589-1600，1996]。Hp2等位基因具有两个拷贝的Hp1等位基因的外显子3和4，这导致外显子3的多聚化结构域发生重复。其结果是，尽管Hp1等位基因蛋白产物仅形成二聚体，但Hp2等位基因蛋白产物结合形成大小为3个单体及以上的环形多聚体。在杂合子中存在含有两种等位基因蛋白产物的线性多聚体。

开发用于对触珠蛋白进行分型的基于抗体的ELISA测定的困难在于所述等位基因蛋白产物的任何一方均显然缺乏特有的抗原决定簇。除了外显子3的重复部位的单一连接以外，触珠蛋白等位基因之间在一级氨基酸序列上没有差别。鉴于需要对大量糖尿病个体(在西方国家占人群的10％)就其触珠蛋白类型进行筛选以确定最佳的治疗，以及需要快速筛选特定人群(即患有急性心肌梗死的个体)，因此非常需要一种用于对触珠蛋白进行分型的简单、快速而廉价的测试方法。

发明内容

在一个实施方式中，本发明提供抗触珠蛋白(Hp)抗体，其与Hp2-2结合的亲和力高于与Hp2-1结合的亲和力，且与Hp2-1结合的亲和力高于与Hp1-1结合的亲和力。在一个实施方式中，抗体可具有如SEQ ID No1所示的氨基酸序列。

在另一个实施方式中，本发明提供抗触珠蛋白(Hp)抗体的抗原结合片段，其与第一种触珠蛋白同种型结合的亲和力高于与第二种触珠蛋白同种型结合的亲和力。在另一个实施方式中，本发明提供抗体或重组蛋白质，其包括上述抗原结合片段。在一个实施方式中，所述抗体是单克隆抗体。在另一个实施方式中，所述抗体是多克隆抗体。在另一个实施方式中，所述抗体是人源化抗体或嵌合型抗体。在另一个实施方式中，所述抗体是scFv抗体。

在另一个实施方式中，本发明提供分离的核酸，其编码本发明的任何抗触珠蛋白(Hp)抗体。在另一个实施方式中，本发明提供分离的核酸，其编码本发明的任何抗原结合片段。

在另一个实施方式中，本发明提供一种确定个体的触珠蛋白类型的方法，所述方法包括(a)将所述个体的生物学样品与抗触珠蛋白抗体相接触；和(b)在一定条件下定量确定所述触珠蛋白的蛋白质与所述抗体之间的结合或相互作用，其中在所述条件下自所述定量确定获得的值特征性表示所述生物学样品中存在Hp1-1、Hp2-1或Hp2-2。

在另一个实施方式中，本发明的任何方法可用于测试个体对糖尿病并发症的易感性。