[发明专利]细胞周期阶段标志物

权利要求书

1. 多肽构建体，其包括可检测的活细胞报道分子和细胞周期阶段依赖性定位控制元件，所述元件是解旋酶B的C末端特殊控制区的磷酸化依赖性亚细胞定位结构域(PSLD)，所述元件的定位在G1和S期期间改变，其中所述构建体在哺乳动物细胞中的易位表明细胞周期位置，其特征在于所述报道分子通过分子量小于1000道尔顿的多肽基团连接到所述元件上。

2. 根据权利要求1的多肽构建体，其中所述多肽基团具有小于700道尔顿的分子量。

3. 根据权利要求1或2的多肽构建体，其中所述多肽基团是七肽。

4. 根据权利要求3的多肽构建体，其中所述七肽是甘氨酸-天冬酰胺-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丝氨酸(GNGGNAS)。

5. 根据权利要求1或2的多肽构建体，其中报道分子是荧光蛋白。

6. 根据权利要求5的多肽构建体，其中所述荧光蛋白选自绿色荧光蛋白(GFP)、增强的绿色荧光蛋白(EGFP)、Emerald和J-Red。

7. 根据权利要求1或2的多肽构建体，其中报道分子是EGFP。

8. 多肽构建体，包括SEQ ID No. 5的氨基酸序列。

9. 编码根据前述任一项权利要求的任何多肽构建体的核酸构建体。

10. 权利要求9的核酸构建体，其中所述构建体额外包括并且可操作地连接到并且受控于至少一个细胞周期非依赖性表达控制元件。

11. 权利要求10的核酸构建体，其中所述表达控制元件是遍在蛋白C启动子或CMV启动子。

12. 根据权利要求9到11任一项的核酸构建体，其包括CMV启动子以及编码PSLD和EGFP或J-Red的序列。

13. 根据权利要求9到11任一项的核酸构建体，其包括遍在蛋白C启动子以及编码PSLD和EGFP或J-Red的序列。

14. 包括权利要求9到13任一项的任何核酸构建体的载体。

15. 根据权利要求14的载体，其中所述载体是病毒载体或质粒。

16. 用根据权利要求9到13任一项的核酸构建体或根据权利要求14到15任一项的载体转染的宿主细胞。

17. 包括根据权利要求16的宿主细胞的稳定细胞系。

18. 根据权利要求1到8任一项的多肽构建体用于确定哺乳动物细胞的细胞周期位置的用途。

19. 用于确定哺乳动物细胞的细胞周期位置的方法，所述方法包括：

a) 在细胞中表达根据权利要求9到13任一项的核酸构建体或根据权利要求14到15任一项的载体；以及

b) 通过监测报道分子所发射的信号来确定细胞周期位置。

20. 确定测试试剂对哺乳动物细胞的细胞周期位置的影响的方法，所述方法包括：

a) 在缺少和存在所述测试试剂的情况下，在所述细胞中表达根据权利要求9到13任一项的核酸构建体或根据权利要求14到15任一项的载体；以及

b) 通过监测报道分子所发射的信号来确定细胞周期位置，其中在缺少和存在所述测试试剂时所测得的发射信号之间的差异指示了测试试剂对细胞的细胞周期位置的影响。

21. 确定测试试剂对哺乳动物细胞的细胞周期位置的影响的方法，所述方法包括：

a) 在存在所述测试试剂的情况下，在所述细胞中表达根据权利要求9到13任一项的核酸构建体或根据权利要求14到15任一项的载体；以及

b) 通过监测报道分子所发射的信号来确定细胞周期位置，

c) 比较存在测试试剂时所发射的信号与缺少测试试剂时所发射信号的已知值；

其中在存在测试试剂时所测得的发射信号与缺少测试试剂时的已知值之间的差异指示了测试试剂对细胞的细胞周期位置的影响。