[发明专利]抗体文库筛选的方法

权利要求书

1.一种筛选分子文库以鉴定和/或选择其中作为一个或多个配体的备选结合伴侣的一个或多个成员的方法，所述方法包括：

a)使在溶液中的表达文库与一个或多个配体相接触；

b)将已经与表达文库的一个或多个成员结合的配体捕获到固相上；以及

c)检测配体的存在，从而检测表达文库中的作为配体的备选结合伴侣的一个或多个成员的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表达文库是噬菌体展示文库或细菌表达文库。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述表达文库是抗体表达文库。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述抗体表达文库包括scFv抗体。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，表达文库成员包括促进捕获步骤(b)的标签或标记。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述配体是细胞表面分子或附着于固相上。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞表面分子以全细胞的组分或细胞的膜部分提供。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述细胞是真核细胞。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞与疾病状态相关联。

10，根据权利要求6至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞是肿瘤细胞。

11.根据权利要求6至10中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞被编码所述配体的核酸转导或转染，或者被编码配体文库的核酸转导或转染，或者是过度表达所述配体的细胞。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述文库衍生于肿瘤细胞或病毒细胞。

13.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，附着于固相的所述配体与编码其的核酸相关联或者与分子标签相关联。

14.根据权利要求6或13所述的方法，其特征在于，所述配体附着的所述固相是微粒及非磁性的。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其特征在于，所述配体包括报告部分或与其相关联以能够检测配体。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述报告部分是DNA分子。

17.根据权利要求15或16所述的方法，其特征在于，所述配体是细胞表面分子，以及所述报告部分是存在于表达所述配体的细胞内的DNA分子。

18.根据权利要求16或17所述的方法，其特征在于，所述DNA分子是内源性的管家基因或是外源性的报告部分。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中提供了多于一个的配体。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其特征在于，在细菌表达培养物的存在下实施所述接触步骤。

21.根据权利要求6至12或15至20中任一项所述的方法，其特征在于，提供的细胞少于5000或1000个。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(b)中的固相磁性的并且优选是微粒。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其特征在于，通过在固相上的捕获分子与和表达文库成员相关联的标签或分子之间的相互作用促进所述捕获步骤。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其特征在于，通过检测位于配体上或与之相关联的报告部分的存在来实施所述检测步骤。

25.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，检测步骤是通过PCR进行的。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其特征在于，表达文库的多个成员存在于相同的检测空间内，并使之与一个或多个配体相接触。