[发明专利]抗体文库筛选的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过其配体分离亲和性文库的成员的新方法。尤其是，本发明涉及一种筛选分子文库(亲和性文库成员)以鉴定或选择其中作为一种或多种配体的备选结合伴侣(binding partners)的一种或多种成员的方法，特别是作为细胞表面配体的备选结合伴侣。本发明的一个优选实施方案提供了改进的文库筛选方法，所述方法将固相选择步骤与用于检测配体存在的聚合酶链反应(PCR)的应用相结合。

背景技术

筛选文库目前成为在药物发现和生物技术中常规的操作(Emili，A.Q，和Cagney，G.(2000)自然生物技术(Nat.Biotechnol).18，393-397；Li，M.(2000)自然生物技术(Nature Biotechnol).18，1251-1256)。一个主要的应用是鉴别具有临床意义的蛋白(Burton，D.R.(2002)自然免疫学综述(Nature Rev.Immunol).2，706-713)。为此目的，对包括数百万个不同成员分子(典型地是蛋白质或肽成员)的文库筛选针对相应配体的亲和力(Winter，G.P.等，WO 90/05144；McCafferty，J.等，WO 92/01047；Breitling，F.等，WO 93/01288)。配体自身可以是细胞(或细胞表面分子)，分子或分子文库，例如活的真核细胞、蛋白质、肽或小的化合物。

尽管一些筛选方法已经被描述过，但应该开发新的或对速度、敏感性、通量和重复性的改进方法以能够产生有前景的备选药物，特别是针对更富有挑战性的配体的药物。另外，当评价筛选方法时，成本效率是一个主要因素。目前，有几种可实施的筛选系统以直接从体内文库和体外文库鉴定成员。被设计进行鉴定药物学相关分子的这些系统的大多数具有共同的特征：每一单个的文库成员的表型与其特定的基因型相连锁。其既通过噬菌体外壳蛋白，细胞膜也通过核糖核酸蛋白复合体。连锁，这些筛选系统功能的一个先决条件，可以针对文库展示而有区别地将所述连锁构建在例如噬菌体(Winter，G.P.等，WO90/05144；McCafferty，J.等，WO 92/01047；Breitling，F.等，WO93/01288；Ladner，R.C，等，WO90/02809；Markland，W.等，WO 92/15679；Harrison，J.L.等(1996)酶学方法(Meth.Enzymol).267，83-109)、细菌(bacteria)(Samuelson，P.等(2002)生物技术杂志(J.Biotechnol).96，129-154)、酵母(yeast)(Wittrup，K.D.等，WO 99/36569；Wittrup，K.D.(2001)当代生物技术评述(Curr.Opin.Biotechnol).12，395-399；Lee，S.Y.等(2003)生物技术动向(Trends in Biotechnol).21，45-52)上，或带核糖体展示(ribosome display)(Kawasaki，G.，WO91/05058；Mattheakis，L.C.等，WO95/11922；A.等.，WO 98/48008；Schaffitzel，C.等(1999)免疫学方法杂志(J.Immunol.Meth).231，119-135；Coia，G.等.(2001)免疫学方法杂志(J.Immunol.Meth).254，191-197)、共价展示(covalent display)(Szostak，J.W.等.WO 98/31700；Szostak，J.W.等.WO 00/47775；Lindqvist，B.H.等.WO 98/37186；Amstutz，P.等.(2001)当代生物技术评述(Curr.Opin.Biotechnol).12，400-405；Wilson，D.S.等。(2001)美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)98，3750-3755)、CIS展示(CIS-display)(McGregor，D.等.WO04/022746；Odegrip，R.等.(2004)美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)101，2806-2810)和细菌双杂交系统(bacterial two-hybridsystems)(Chien等.(1991)美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)88，9578)。所有这些方法背后的构思是应用系统将这些亲合性分子翻译和展示，所述系统能够富集、分离和鉴别文库成员。