[发明专利]多RNA聚合酶Ⅲ启动子表达构建体

权利要求书

1.一种表达构建体，其包括至少两个不同的RNA聚合酶III启动子，其中每个启动子与编码至少一种RNA效应物分子的核酸序列可操纵地连接。

2.权利要求1的表达构建体，其中所述至少两个不同的RNA聚合酶III启动子是病毒或真核细胞来源的。

3.权利要求1的表达构建体，其中所述至少两个不同的RNA聚合酶III启动子独立地选自1型RNA聚合酶III启动子、2型RNA聚合酶III启动子、和3型RNA聚合酶III启动子(包括H1、7SK、U6和MRP)。

4.权利要求1的表达构建体，其中所述至少一种RNA效应物分子是短发夹RNA。

5.权利要求4的表达构建体，其中所述短发夹RNA包括选自SEQID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、和SEQ ID NO：11的核酸序列，其中用U取代T。

6.权利要求1的表达构建体，其中所述表达构建体包括3到8个RNA聚合酶III启动子。

7.权利要求6的表达构建体，其中所述表达构建体包括4个RNA聚合酶III启动子。

8.权利要求7的表达构建体，其包括7SK和U6启动子。

9.权利要求6的表达构建体，其中RNA聚合酶III启动子选自H1、7SK、和U6。

10.权利要求1的表达构建体，其中所述至少一种RNA效应物分子能够调控靶基因的表达。

11.权利要求10的表达构建体，其中所述靶基因是病毒基因。

12.权利要求11的表达构建体，其中所述病毒基因是HBV或HCV基因。

13.权利要求1的表达构建体，其中所述RNA聚合酶III启动子中的至少两个与编码不同RNA效应物分子的序列可操纵地连接。

14.权利要求1的表达构建体，其中每个RNA聚合酶III启动子与编码相同的RNA效应物分子的核酸序列可操纵地连接。

15.权利要求1的表达构建体，其中相同的RNA聚合酶III启动子的拷贝不超过2个。

16.权利要求15的表达构建体，其中相同的RNA聚合酶III启动子的拷贝不超过1个。

17.权利要求1的表达构建体，其中所述的RNA聚合酶III启动子中的至少一个包括SEQ ID NO：5。

18.权利要求1的表达构建体，其中所述的RNA聚合酶III启动子中的至少一个包括SEQ ID NO：5，不同之处在于241到244位核苷酸包括gggg。

19.一种分离的核酸序列，其包括SEQ ID NO：5。

20.权利要求19的分离的核酸序列，其包括SEQ ID NO：5，不同之处在于241到244位核苷酸包括gggg。

21.权利要求19的分离的核酸序列，其包括SEQ ID NO：5，不同之处在于开始于235位核苷酸的Sal I限制性位点被选自由Aat II、Acc65I、Acl I、Afl II、AgeI、Apa I、ApaL I、Asc I、AseI、AsiS I、Avr II、BamHI、Bcl I、BfrB I、Bgl II、BmgB I、BseY I、BsiW I、BspD I、BspE I、BspHI、BsrB I、BsrG I、BssH II、BssS I、BstB I、BstZ17 I、Cla I、Dra I、EagI、EcoR I、EcoR V、Fse I、Fsp I、Hind III、Hpa I、Kas I、Kpn I、Mfe I、Mlu I、Msc I、Nae I、Nar I、Nco I、Nde I、NgoM IV、Nhe I、Not I、NruI、Nsi I、Pac I、PaeR7 I、Pme I、Pml I、Pst I、Pvu I、Pvu II、SacI、SacII、SbfI、Sca I、Sfo I、Sma I、SnaB I、Spe I、Sph I、Ssp I、Stu I、SwaI、Tli I、Xba I、Xho I、和Xma I组成的组中的限制性位点取代。