[发明专利]通过rh核心蛋白聚糖－Fc融合蛋白抑制纤维发生的方法

权利要求书

1.用于抑制肝纤维发生的方法，该方法包括向需要该治疗的患者施用有效 量的肝星形细胞活化的rh核心蛋白聚糖-Fc拮抗剂。

2.权利要求1的方法，其中所述拮抗剂防止病毒性肝炎和/或诱发的肝损 伤病程中肝纤维化的发展。

3.权利要求1的方法，其中所述拮抗剂防止慢性肝炎和/或诱发的肝损伤 病程中肝纤维化的发展。

4.权利要求1的方法，其中所述拮抗剂是与肝星形细胞活化相关的纤维 变性状况的拮抗剂。

5.权利要求1的方法，其中所述拮抗剂是核心蛋白聚糖融合蛋白。

6.权利要求5的方法，其中所述融合蛋白是由核酸分子编码的，其包含 通过肽接头相连的核心蛋白聚糖和IgGI 1 Fc片段。

7.权利要求6的方法，其中所述含19个氨基酸的肽接头出现在rh核心蛋 白聚糖和其中的人IgG1 Fc之间；而且所述肽接头含8个选自甘氨酸、丝氨酸、 丙氨酸和苏氨酸的氨基酸。

8.权利要求6的方法，其中所述人IgG1 Fc含有N-末端调节的人IgG1的 铰链、CH2和CH3结构域的部分。

9.权利要求6的方法，其中所述rh核心蛋白聚糖-Fc融合蛋白显示出增 强的体外生物学活性，其相对于核心蛋白聚糖为至少4倍。

10.权利要求6的方法，其中所述rh核心蛋白聚糖-Fc融合蛋白显示出比 其亲本蛋白——核心蛋白聚糖更长的寿命。

11.生产rh核心蛋白聚糖-Fc融合蛋白的方法，其包括使用能在其生长培 养基中以在48小时时间段内超过每百万细胞10.mu.g来产生rh核心蛋白聚糖- Fc融合蛋白的Cos-7细胞系。

12.制备含rh核心蛋白聚糖、柔性肽接头和修饰的人IgG1 Fc的重组融合 蛋白的方法，其包括以下步骤

产生Cos-7细胞系；和，

在其生长培养基中以在48小时时间段内超过每百万细胞10.mu.g来表达 重组蛋白的条件下，使细胞系生长，其中所述重组融合蛋白显示出增强的体外 生物学活性，其相对于核心蛋白聚糖为至少4倍，而没有不希望的副作用。

13.权利要求12的方法，其中所述人IgG Fc包含N-末端有修饰的人IgG1 的铰链、CH2、和CH3结构域的部分，其中IgG1 Fc N-末端的4个氨基酸SPGK 被10个氨基酸ITSEFAAARV替代。