[发明专利]FSH的纯化方法

权利要求书

1.一种重组人FSH或FSH变异体的纯化方法，其特征在于，所述的纯 化方法包括使含有FSH的液体经受以下步骤，但顺序可随意：

(1)染料亲和层析；

(2)疏水作用层析；和

(3)反相层析。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中的染料 亲和层析采用具有固定化汽巴龙蓝F3G-A的树脂。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中染 料亲和层析采用的树脂是蓝琼脂糖凝胶FF。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中的染料 亲和层析采用pH值为或大约为6.5至11.5的磷酸钠缓冲液作为洗脱 液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)的疏水作 用层析采用Toyopearl丁基650M。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)的疏水作 用层析采用磷酸钠/硫酸铵作为洗脱液。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)的反相层 析采用Source 30RPC作为树脂。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)的反相层 析采用含有2-丙醇的醋酸铵作为洗脱液。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤以如下顺序进 行：

(1)染料亲和层析；

(2)疏水作用层析；和

(3)反相层析。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括阴离 子交换层析步骤(0)。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的阴离子交换层析 步骤在步骤(1)、(2)和(3)之前进行。

12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述步骤(0)的阴离子 交换层析采用Q琼脂糖凝胶FF树脂或Fractogel EMD TMAE HiCap树 脂。

13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述步骤(0)的阴离子 交换层析采用硼酸盐缓冲液作为洗脱液。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的硼酸盐缓冲液 pH值为8.5或大约8.5。

15.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括阴离 子交换层析步骤(4)的第二步骤。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述的阴离子交换层析 步骤(4)的第二步骤在步骤(1)、(2)和(3)之后进行。

17.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述的第二次阴离子交 换层析步骤(4)采用Fractogel EMD TMAE HiCap树脂或Q琼脂糖凝胶 FF树脂。

18.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述的第二次阴离子交 换层析步骤(4)采用硼酸盐缓冲液和增加NaCl浓度梯度。

19.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述的方法包括在第二 次阴离子交换层析步骤(4)之后的纳米过滤步骤(4’)。

20.如权利要求19所述的方法，其特征在于，所述的方法包括在纳米 过滤步骤(4’)之后的超滤步骤(5)。

21.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的任何洗脱液和/或 缓冲液均含有作为抗氧化剂的L-蛋氨酸。

22.一种人重组FSH的纯化方法，其特征在于，所述的方法包括使 FSH经受以下步骤：

(-1)超滤；

(0)在Q琼脂糖凝胶FF上用硼酸盐/NaCl、L-蛋氨酸，pH值8.5 或大约为8.5作为洗脱液进行阴离子交换层析；

(1)经洗脱步骤(0)之后，在蓝琼脂糖凝胶FF上进行染料亲和 层析步骤，以磷酸盐、NaCl、L-蛋氨酸，pH值为7或大约 为7作为洗脱液；

(2)经洗脱步骤(1)之后，在Toyopearl丁基650M上进行疏水 作用层析步骤，以磷酸盐、硫酸铵、L-蛋氨酸，pH值为7 或大约为7作为洗脱液；

(3)经洗脱步骤(2)之后，在Source 30RPC上以醋酸铵、L- 蛋氨酸、2-丙醇，pH值为7.6或大约为7.6作为洗脱液 进行反相层析步骤；

(4)经洗脱步骤(3)之后，在FractogelEMD TMAE hicap树脂上 用硼酸盐、L-蛋氨酸、pH值为8.5或大约为8.5，和NaCl 进行阴离子交换层析步骤；

(4’)经洗脱步骤(4)之后进行纳米过滤；以及

(5)经步骤(4’)之后进行超滤。