[发明专利]FSH的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及促卵泡激素(FSH)的纯化领域。

技术背景

促卵泡激素(FSH)是一种属于促性腺激素类的可注射的蛋白质。 FSH用于女性和男性病人的不孕和生殖紊乱的治疗。

天然状态下，FSH产生于垂体腺。作为药用，FSH可以重组产生 (rFSH)，或者可以从绝经后的妇女尿中分离得到(uFSH)。

FSH用于女性病人在辅助生殖技术(ART)中诱导排卵(OI)和控制性 超排卵(COH)。在一典型的诱导排卵治疗疗程中，病人在大约6到12 天内每天给予FSH或其变异体注射(大约75到300IU FSH/日)。在一种 典型的控制性超排卵治疗疗程中，病人在大约6到12天内每天给予FSH 或其变异体注射(大约150-600IU FSH/日)。

FSH也用于诱导精子减少的男性病人的精子产生。在促性腺激素分 泌不足的性腺机能减退的男性病人中，用150IU FSH每周3次并结合 2,500IU hCG每周两次的疗程已经成功地使精子数量得以提高 [Burgues等人；Subcutaneous self-administration of highly purified follicle stimulating hormone and human chorionic gonadotrophin for the treatment of male hypogonadotrophic hypogonadism.Spanish  Collaborative Group on Male Hypogonadotrophic Hypogonadism；Hum.Reprod.；1997，12，980-6]。

因为FSH在治疗生殖紊乱中的重要性，所以最好提供高纯度和高比 活性的FSH。FSH治疗需要重复注射。高度纯化的FSH制剂可以皮下给 药，病人也可以自己给药，因此大大方便和依从了病人。

Lynch等人所述为一种人垂体FSH的纯化方法[The extraction and purification of human pituitary follicle-stimulating hormone and luteinising hormone；Acta Endocrinologica，1988，288，12-19]。 该方法包括阴离子和阳离子交换层析、免疫亲和提取以及尺寸排阻层析。 该方法所得垂体FSH的比活性为4,990(免疫测定)IU/mg，包括16IU/mg LH在内。用干重或于溶液中在280nm的光谱下吸收来测定蛋白质含量 (假定A²⁸⁰_1cm时1g/l等于1)。

WO 98/20039(IBSA Institut Biochimique SA)叙述一种人尿FSH 纯化方法，原材料为尿提取物，也称为人绝经期促性腺激素(hMG)。该 方法用DEAE型的弱碱性阴离子交换树脂进行离子交换层析，然后在有 一蒽醌衍生物作为配体的树脂上进行亲和层析。据称，该方法得到的 尿FSH不含LH，其比活性为6,870(免疫测定)IU/mg。假定1mg/ml蛋 白质水溶液在277nm时光密度为0.62的情况下，在路径长度为1cm的 石英比色管中测定蛋白质含量。

WO 00/63248(Instituto Massone SA)叙述一种人尿中包括的FSH 的促性腺激素纯化方法。该方法包括以下步骤：一强阳离子烃基硫酸型 树脂的离子交换层析、一强阴离子树脂的离子交换层析以及疏水作用层 析(HIC)。据报道，所得的FSH制剂的比活性为8,400IU/mg (Steelman-Pohley method：Assay of the follicle stimulating hormone based on the augmentation with human chorionic gonadotrophin；Endocrinology；1953，53，604-616)和每75IU FSH 少于1IU LH生物活性(rat seminal vesicle weight gain method：Van Hell H，Matthijsen R&GA Overbeek；Acta Endocrinol，1964，47， 409)。用Lowry方法测定蛋白质含量[O.H.Lowry et al.，J.Biol. Chem.，1951，193，265]。