[发明专利]靶物质的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用靶物质和能够与其进行特异结合的物质之间的反应(例如抗原抗体反应)的靶物质检测方法。具体而言涉及识别并检测被检试样中所含多种靶物质的方法。

背景技术

由于确立了单克隆抗体制备技术，则可以得到能够对特定抗原进行特异反应的抗体，开发·改良利用抗原抗体反应特异性检测抗原的分析系统在研究·临床等所有领域都是不可缺少的。这样的分析系统中，通常对与抗原反应的抗体实施特定标记，反应后以检测该标记替代检测抗原。另外迄今为止为了更进一步提高检测灵敏度，对标记种类和检测方法等也正在进行各种研究，例如有使用抗生物素蛋白·生物素系统、荧光色素、放射性同位素的方法，除此之外，作为进一步提高检测灵敏度的方法，还可以列举免疫^-PCR法(例如参照T.Sano etal.，Science，vol.258，120-122(1992))、Double Determinant Immuno-PCR法(例如参照“今井浩三、铃木朝子、日野田裕治，免疫^-PCRを用いた微量抗原検出法，蛋白質 核酸 酵素，羊土社，1996年，Vol.41，No.5，p.614-617”。)、使用寡核苷酸和DNA树状聚体(デンドリマ)并使用免疫印迹法检测的方法(例如参照“特表2001-503517号”)等。

发明公开

但是上述检测方法，都是仅以被检试样所含的多种靶物质(抗原)中的一种特定靶物质作为检测对象的方法，迄今为止，还没有能够一次识别并检测两种以上特定靶物质的方法。因此当要一次识别、检测两种以上的靶物质时，必须根据其种类分别用不同检测系统进行检测，存在着检测所需时间和劳力方面的效率问题。从实际情况考虑，最近几年要求从被检试样中检测多种靶物质(生物标记、病因物质、病原体等)的情况非常多。例如在临床检查领域中，有癌症的诊断和抗癌剂的药效评价、脑中风和心肌梗塞的诊断和感染症中病原体确定等情况；在食品和环境领域中有确定由残留农药和细菌引起的食品污染物质和确定二英、多氯联苯(PCB)等环境污染物质的情况。因此迫切需要一种能够通过一次检测处理同时检测这些物质的方法。

由此本发明要解决的课题在于提供可以一次识别、检测被检试样中所含多种靶物质的靶物质检测方法。

为了解决上述课题，本发明者进行锐意研究，结果发现如果制备能够与被检试样所含的多种靶物质中待检测的两种以上靶物质分别进行特异结合的物质(结合物质)，进行标记处理使各结合物质能够对应靶物质种类进行识别，通过靶物质与结合物质的特异结合反应生成两种物质的复合物，在其后的检测阶段就可以同时、明确地分别检测各复合物中的固有标记(所谓同时多项目检测)，由此完成了本发明。

即，本发明如下：

(1)一种识别并检测被检试样中所含的多种靶物质的方法，该方法包括：

(i)使固定在支持物上的靶物质和/或没有固定的靶物质与经过标记处理能够对应于所述靶物质的种类进行识别的结合物质接触，生成所述靶物质与所述结合物质的复合物的步骤(以下称为靶物质-结合物质复合物的生成步骤)；以及

(ii)检测生成前述复合物的结合物质中的标记的步骤(以下称为标记检测步骤)。

在本发明方法中前述结合物质中的标记部分至少可以通过衔接子部分固定在该结合物质上。作为所述衔接子部分，可以列举例如选自蛋白质G、蛋白质A、蛋白质L以及蛋白质A和蛋白质G的融合蛋白质的至少一种。

在本发明方法中作为前述结合物质，可以列举例如与作为标记物质的寡核苷酸链生成复合物(寡核苷酸复合物)的物质。另外，作为前述标记处理，可以列举例如对上述寡核苷酸链实施的下述(i)～(ix)的处理。

(i)设置限制酶切割位点的处理

(ii)设置可以通过PCR扩增的区域的处理

(iii)使之使之含有放射性同位素的处理

(iv)使之与荧光色素相结合的处理

(v)使之与酶相结合的处理

(vi)设置光照射切割位点的处理

(vii)设置活性氧切割位点的处理

(viii)使之与经标记的树状聚体相结合的处理

(ix)在碱基种类中设置至少一种不同碱基的处理。

作为检测前述标记的步骤，可以列举例如通过电泳检测由PCR扩增所得的产物的步骤。

在本发明方法中作为前述结合物质，可以列举例如与作为标记物质的寡肽链生成复合物(寡肽复合物)的物质。作为前述标记处理，可以列举例如对上述寡肽链，实施的下述(i)～(vii)的处理。