[发明专利]蜜二糖操纵子表达系统

权利要求书

1.一种可在原核生物宿主中表达的载体，它包含操作性连接于转录单元的、缺乏CRP1结合位点的蜜二糖操纵子的melAB启动子，该转录单元含有对于所述宿主来说是异源的核酸序列，所述核酸序列的表达由所述启动子控制，其中，所述缺乏CRP1结合位点的melAB启动子由SEQ ID NO：1或其互补序列构成。

2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述转录单元在所述转录单元翻译起始位点上游还含有翻译起始区域，该翻译起始区域由序列AGGAGATATACAT，即SEQ ID NO：2构成，且所述翻译起始区域与所述核酸序列操作性连接。

3.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述转录单元还含有操作性连接于所述核酸序列的信号序列。

4.如权利要求3所述的载体，其特征在于，所述信号序列是原核生物信号序列。

5.如权利要求4所述的载体，其特征在于，所述原核生物信号序列选自编码糖、氨基酸、维生素和离子的周质结合蛋白的信号肽的核酸序列。

6.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述转录单元还含有转录终止区域，该转录终止区域是rrnB转录终止序列。

7.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述核酸序列编码多肽。

8.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述核酸序列编码抗体。

9.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述核酸序列编码Fab片段。

10.如权利要求9所述的载体，其特征在于，所述Fab片段的重链和轻链由双顺反子转录单元编码，各链操作性连接于信号序列和位于所述转录单元翻译起始位点上游的相同的翻译起始区域。

11.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述启动子和所述操作性连接的转录单元由SEQ ID NO：3或其互补序列构成。

12.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述启动子和所述操作性连接的转录单元由SEQ ID NO：4或其互补序列构成。

13.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述载体是自主复制的质粒、粘粒、噬菌体、病毒或逆转录病毒。

14.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述载体是自复制的质粒。

15.权利要求1-14中任一项所述的载体在调节核酸序列在原核生物宿主中异源表达中的用途。

16.如权利要求15所述的载体的用途，其特征在于，所述核酸序列编码多肽。

17.如权利要求16所述的载体的用途，其特征在于，所述多肽是Fab片段，且该Fab片段的重链和轻链以相等的量表达。

18.一种在原核生物宿主中可表达的分离纯化的核酸，它含有操作性连接于转录单元的、缺乏CRP1结合位点的蜜二糖操纵子的melAB启动子，该转录单元含有对于所述宿主来说是异源的核酸序列，所述核酸序列的表达由所述启动子控制，其中，所述缺乏CRP1结合位点的melAB启动子由SEQ ID NO：1或其互补序列构成。

19.如权利要求18所述的分离纯化的核酸，其特征在于，所述启动子和所述操作性连接的转录单元由SEQ ID NO：3或其互补序列构成。

20.如权利要求18所述的分离纯化的核酸，其特征在于，所述启动子和所述操作性连接的转录单元由SEQ ID NO：4或其互补序列构成。

21.用权利要求1-14中任一项所述的载体转化的原核生物宿主。

22.用权利要求18-20中任一项所述的分离纯化的核酸转化的原核生物宿主。

23.一种在宿主中生产多肽的方法，该方法包括步骤：

a)构建权利要求1-14中任一项所述的载体；

b)用所述载体转化原核生物宿主；

c)在适当条件下，使所述多肽在细胞培养系统中表达；

d)从细胞培养系统中回收所述多肽。

24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所产生的多肽是Fab片段，该Fab片段的重链和轻链在所述细胞培养系统中以相同的量表达。

25.如权利要求23或24所述的方法，其特征在于，所述多肽的表达是在含有甘油的培养基中进行的。