[发明专利]二酰甘油酰基转移酶测定法

权利要求书

1.测量DGAT活性的方法，所述方法包括：将包含至少一种DGAT底物的胶束与包含DGAT的微粒体接触，并测定所得反应混合物中的甘油三酯产量。

2.根据权利要求1的方法，其中包含DGAT底物的胶束选自：

-包含磷脂酰丝氨酸或者磷脂酰胆碱的胶束；

-包含磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱的胶束；或

-包含重量比为1∶1的磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱的胶束。

3.根据权利要求1的方法，其中反应混合物还包含辅酶A活化的脂肪酸。

4.根据权利要求3的方法，其中辅酶A活化的脂肪酸选自棕榈酰-CoA或者油酰基-CoA。

5.根据权利要求3或4的方法，其中所述辅酶A活化的脂肪酸的部分被可检测性地标记。

6.根据权利要求5的方法，其中所述辅酶A活化的脂肪酸的部分被放射性标记。

7.根据权利要求3到6任一项的方法，其中辅酶A活化的脂肪酸是油酰基-CoA，并且所述油酰基-CoA的部分是[³H]-油酰基-CoA。

8.根据权利要求1的方法，其中DGAT底物由硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油或者1，2-二油酰基-sn-甘油组成。

9.根据权利要求1的方法，其中包含DGAT的微粒体是表达人DGAT1(SEQ ID No.2)蛋白质的昆虫细胞的膜制备物。

10.根据权利要求1的方法，其中使用闪烁固相支持体介质测定甘油三酯的生产。

11.鉴定测试化合物是否能够调节DGAT活性的方法，所述方法包括：在存在和不存在测试化合物时，将包含至少一种DGAT底物的胶束与包含DGAT的微粒体接触，并测定所得到的反应混合物中的甘油三酯产量，并且其中存在测试化合物时甘油三酯产量的改变表明所述化合物能够调节DGAT活性。

12.根据权利要求11的方法，其中包含DGAT底物的胶束选自：

-包含磷脂酰丝氨酸或者磷脂酰胆碱的胶束；

-包含磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱的胶束；

-包含的磷脂酰胆碱浓度小于或等于磷脂酰丝氨酸浓度的胶束；

-包含3∶1摩尔比的磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱的胶束；

-包含3.5∶1.3摩尔比的磷脂酰丝氨酸和磷脂酰胆碱的胶束。

13.根据权利要求11的方法，其中反应混合物还包含辅酶A活化的脂肪酸。

14.根据权利要求13的方法，其中辅酶A活化的脂肪酸选自棕榈酰-CoA或者油酰基-CoA。

15.根据权利要求13或14的方法，其中所述辅酶A活化的脂肪酸的部分被可检测性地标记。

16.根据权利要求15的方法，其中所述辅酶A活化的脂肪酸的部分被放射性标记。

17.根据权利要求13到16任一项的方法，其中辅酶A活化的脂肪酸是油酰基-CoA并且所述油酰基-CoA的部分是[³H]-油酰基-CoA。

18.根据权利要求11的方法，其中DGAT底物由硬脂酰-2-花生四烯酰-sn-甘油或者1，2-二油酰基-sn-甘油组成。

19.根据权利要求11的方法，其中包含DGAT的微粒体是表达人DGAT1(SEQ ID No.2)蛋白质的昆虫细胞的膜制备物。

20.根据权利要求11的方法，其中使用闪烁固相支持体介质测定甘油三酯产量。

21.治疗病理特征是DGAT酶的作用的疾病，尤其是肥胖症和高三酰甘油相关疾病的方法，所述方法包括对需要其的受试者施用治疗有效量的使用根据权利要求11到20任一项的方法鉴定的化合物。