[发明专利]涂层脂质复合体和它们的用途

说明书

本发明涉及阳离子脂质，含有阳离子脂质的组合物及其用途，还涉及用于将化合物传递到细胞中的方法。

分子生物学以及分子医学都严重依赖于将生物学活性化合物到细胞中的引入。这种生物学活性化合物典型分别包含，其中，DNA、RNA以及肽和蛋白质。不得不克服的障碍典型地是具有带负电荷的外表面的脂双层。本领域中，已经开发了许多技术以穿透细胞膜并且因而引入所述生物学活性化合物。然而，为实验室用途设想的一些方法不能用于医疗领域并且更具体而言不适于药物递送。例如，如果无论如何，本领域已知的电穿孔和冲击法将仅容许生物学活性化合物的局部递送。除所述脂双层细胞膜之外也包含转运体系。因此，采用努力以使用该种类的转运体系，以便将所述生物学活性化合物传递穿过所述细胞膜。然而，由于这种转运体系的特异性或交叉反应性，它们的用途不是一般可应用的方法。

在本领域中描述的用于将生物学活性化合物转移到细胞中的更一般可应用的方法是病毒载体的使用。然而，病毒载体仅可以用于将基因有效地转移到一些细胞类型中；但是它们不能用于将化学合成的分子引入到所述细胞中。

一种备选方法是使用所谓的脂质体(Bangham，J.Mol.Biol.13，238-252)。脂质体是两亲的脂质在水中缔合时产生的泡状体。脂质体典型地包含同心排列的磷脂双层。取决于层的数量，脂质体可以分类为小的单薄层状的泡状体、多薄层状的泡状体和大的单薄层状的泡状体。已经证明脂质体是有效的递送剂，因为它们可以将亲水的化合物结合到水中间层中，而将疏水性化合物结合到所述脂质层中。本领域中众所周知，脂质剂型的组成以及它的制备方法对于得到的脂质聚集体的结构和大小并因而对于所述脂质体具有影响。也已知脂质体结合阳离子的脂质。

除了作为脂质体的组分之外，阳离子的脂质也吸引了相当大的关注，因为它们因而可以用于生物聚合物的细胞递送。利用阳离子的脂质，由于静电相互作用，可以基本上将任何阴离子的化合物以定量方式胶囊化。另外，相信阳离子的脂质与带负电荷的细胞膜的相互作用引发细胞膜转运。已经发现，含有阳离子脂质的脂质体剂型的使用或阳离子脂质像这样连同生物学活性化合物的使用需要试探法，因为每个剂型是有限有用的，因为它典型地可以将质粒递送到一些而不是全部细胞类型中，通常不存在血清。

要通过它们转运的脂质和生物学活性化合物的电荷和/或质量的比例，已经证实了是不同类型的所述生物学活性化合物递送中的关键因素。例如，已经显示，大小上包含5,000至10,000个碱基的适于质粒递送的脂质剂型一般对于寡核苷酸诸如合成的核酶或典型包含约10至约50碱基的反义分子的递送不是有效的。另外，最近已经表明，即使在相同的细胞类型中，用于反义寡核苷酸和核酶的最佳递送条件也是不同的。

美国专利6,395,713公开了基于典型由亲脂性基团、连接体和头基团组成的组合物的阳离子脂质，和使用这种组合物用于将生物学活性化合物转移到细胞中。

构成本发明基础的问题是提供将生物学活性化合物引入到细胞优选动物细胞中的方法。构成本发明基础的进一步的问题是提供用于核酸的递送剂，所述核酸特别是小核酸诸如siRNA、siNA和RNAi或适配子和spiegelmers。

构成本发明基础的更进一步的问题是提供具有良好转染和递送特征的递送剂，同时在体内提供长循环时间。

通过结合于此的独立权利要求的主题物质解决这些问题。可以从后附其上的从属权利要求获得优选实施方案。

在第一方面中，通过包含下列物质的脂质组合物，也解决了构成本发明基础的问题

至少一种第一脂质组分，

至少一种第一辅助脂质，和

一种在体内条件下可以从所述脂质组合物除去的屏蔽化合物。

在第一方面的一个实施方案中，所述屏蔽化合物选自包含PEG、HEG、聚羟乙基淀粉(polyHES)和聚丙烯的组。

在第一方面的一个优选实施方案中，所述屏蔽化合物是PEG2000或PEG5000。

在第一方面的一个实施方案中，所述组合物包括另外的组分和/或第二辅助脂质。

在第一方面的一个实施方案中，所述脂质组合物包含核酸，其中这种核酸优选是所述另外的组分。

在第一方面的一个优选实施方案中，所述核酸选自包含RNAi、siRNA、siNA、反义核酸、核酶、适配子和spiegelmers的组。

在第一方面的一个实施方案中，所述屏蔽化合物是PEG和神经酰胺的缀合物。

在第一方面的一个优选实施方案中，所述神经酰胺包含至少一种6至10个碳原子，优选8个碳原子的短碳链取代基。