[发明专利]减少含有目的维生素K依赖性蛋白质的组合物中的蛋白质污染物的含量

权利要求书

1.用于减少含有在细胞培养条件下产生的重组目的维生素K依赖 性蛋白质的组合物中蛋白S含量的方法，所述方法至少包括下列步骤：

(A)使第一组合物与能够结合目的维生素K依赖性蛋白质的固相 材料接触，和收集因而产生的含有目的维生素K依赖性蛋白质的第二组 合物；和

(B)使第一组合物与携带亲和配体的固相材料接触，所述携带亲 和配体的固相材料能够结合蛋白S，而目的维生素K依赖性蛋白质不结 合至所述固相并流过色谱柱；和收集因而产生的含有目的维生素K依赖 性蛋白质的第二组合物；和

由此从所述第一组合物到所述因而产生的第二组合物，蛋白S水平 减少至少2倍，所述蛋白S水平表示为相对于目的维生素K依赖性蛋白 质的百万分率。

2.根据权利要求1的方法，其中目的维生素K依赖性蛋白质是凝 血因子IX多肽。

3.根据权利要求1的方法，其中目的维生素K依赖性蛋白质是凝 血因子X多肽。

4.根据权利要求1的方法，其中目的维生素K依赖性蛋白质是凝 血因子VII多肽。

5.根据权利要求4的方法，其中目的维生素K依赖性蛋白质是野 生型人凝血因子VIIa。

6.根据权利要求4的方法，其中凝血因子VII多肽包含选自P10Q 和K32E的氨基酸置换。

7.根据权利要求1的方法，其中所述蛋白S是仓鼠蛋白S。

8.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中蛋白S水平减少至少 5倍，所述蛋白S水平表示为相对于目的维生素K依赖性蛋白质的百万 分率。

9.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中蛋白S水平减少至少 10倍，所述蛋白S水平表示为相对于目的维生素K依赖性蛋白质的百万 分率。

10.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中蛋白S水平减少至少 50倍，所述蛋白S水平表示为相对于目的维生素K依赖性蛋白质的百万 分率。

11.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中蛋白S水平减少至少 100倍，所述蛋白S水平表示为相对于目的维生素K依赖性蛋白质的百 万分率。

12.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中在未纯化的细胞培养 物上清液中的蛋白S污染物含量为至少500ppm。

13.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中在因而产生的含有目 的维生素K依赖性蛋白质的经纯化的组合物中蛋白S污染物的总含量为 至多100ppm。

14.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中在因而产生的含有目 的维生素K依赖性蛋白质的经纯化的组合物中蛋白S污染物的总含量为 至多50ppm。

15.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中在因而产生的含有目 的维生素K依赖性蛋白质的经纯化的组合物中蛋白S污染物的总含量为 至多10ppm。

16.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中步骤(B)的所述固 相材料携带有针对蛋白S的单克隆抗体。

17.根据权利要求1-7中任一项的方法，其中步骤(A)的所述固 相材料携带有针对目的维生素K依赖性蛋白质的亲和配体。

18.根据权利要求17的方法，其中步骤(A)的所述固相材料携带 有针对目的维生素K依赖性蛋白质或其类似物的单克隆抗体。

19.根据权利要求17的方法，其中所述固相材料是对目的维生素 K依赖性蛋白质或其类似物具有亲和力的三嗪配体。

20.根据权利要求17的方法，其中步骤(A)的所述固相材料携带 有所述目的维生素K依赖性蛋白质的抑制剂。