[发明专利]高质量核酸的无细胞生物合成及其用途

权利要求书

1、一种在无细胞体系中产生高质量核酸的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(a)使反应混合物中的环式模板和一个或多个引物结合，该引物至少与环式模板的一个链互补从而形成模板-引物复合物；

(b)以至少一种高保真核酸聚合酶培育模板-引物复合物以产生含有串联排列的环式模板单位的多联体；以及

(c)将多联体切割成较小的至少包含一个具有目的基因的送递单位(delivery unit)。

2、根据权利要求1所述的在无细胞体系中制造高质量核酸的方法，其特征在于其进一步包括：

(d)通过以下步骤中的一个或多个处理较小片段：填充或者除去较小片段的末端；连接较小片段的末端以产生环化的较小片段；以及超螺旋化环化的较小片段。

3、根据权利要求1或2所述的在无细胞体系中制造高质量核酸的方法，其特征在于其进一步包括：

修饰较小的片段或环化的较小片段以产生修饰的末端和/或修饰的内部碱基。

4、根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的在无细胞体系中制造高质量核酸的方法，其特征在于其进一步包括：

将较小片段或环化的较小片段与肽结合。

5、根据权利要求1-4中任一项权利要求所述的在无细胞体系中制造高质量核酸的方法，其特征在于其中所述的送递单位(delivery unit)包含一个或多个表达盒。

6、根据权利要求1-5中任一项权利要求所述的在无细胞体系中制造高质量核酸的方法，其特征在于其中所述的高保真度核酸聚合酶是Phi29DNA聚合酶或其衍生物。

7、根据权利要求1-5中任一项权利要求所述的在无细胞体系中制造高质量核酸的方法，其特征在于其中所述的高保真度核酸聚合酶是选自下列聚合酶中的一种：DNA聚合酶I，DNA聚合酶III，T3 DNA聚合酶，T4 DNA聚合酶，T5 DNA聚合酶，T7聚合酶，以及它们的衍生物。

8、根据权利要求1-7中任一项权利要求所述的在无细胞体系中制造高质量核酸的方法，其特征在于其中所述的切割多联体是通过使用限制酶完成的。

9、一组合物，其特征在于该组合物包含通过权利要求1-8中任一项权利要求的方法制备的送递单位(delivery unit)。

10、由权利要求1-8中任一项权利要求的方法制备的送递单位(delivery unit)在制造预防或治疗疾病或人类、动物或植物的遗传病中的用途。

11、根据权利要求10所述的用途，其特征在于其中所述的疾病是由下列病毒中的一个引起的：HIV，流感病毒(influenza virus)，副流感病毒(parainfluenza virus)，腺病毒(adenovirus)，冠状病毒(corona virus)，单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)，带状疱疹病毒(herpes zostervirus)，乳头瘤病毒(papilloma virus)以及鼻病毒(rhino virus)。

12、根据权利要求10所述的用途，其特征在于其中所述的疾病是由细菌(bacteria)、分枝杆菌(mycobacteria)、真细菌(eubacteria)或真菌(fungi)引起的。

13、由权利要求1-8中任一项权利要求的方法制备的送递单位(delivery unit)或权利要求9所述的组合物在人类或动物免疫中的用途。

14、根据权利要求13所述的用途，其特征在于其中所述的送递单位(delivery unit)或组合物是通过定向注射、气雾剂、脂质体或病毒衍生颗粒(virus derived particle)送递。