[发明专利]蛋白分离和纯化

权利要求书

1.纯化在宿主细胞中以重组蛋白体样组装体(RPBLA)表达的重组融合蛋白的方法，其包括步骤：

(a)提供以重组蛋白体样组装体表达融合蛋白的转化宿主细胞的水性匀浆，所述RPBLA具有预定密度；

(b)形成所述匀浆的不同密度的区域，以提供含有浓度相对提高的RPBLA的区域和含有浓度相对匮乏的RPBLA的区域；以及

(c)从含有浓度相对提高的RPBLA的区域中分离RPBLA匮乏的区域，由此纯化所述融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述RPBLA的预定密度大于匀浆中存在的基本上所有内源宿主细胞蛋白的密度。

3.根据权利要求1-2所述的方法，其中所述融合蛋白含有两个连接在一起的序列，其中一个序列是蛋白体诱导序列而另一个是目的产物的序列。

4.根据权利要求1-3所述的方法，其所述匀浆的不同密度区域是通过在提供不同密度的溶质存在下离心所述匀浆来提供的。

5.根据权利要求1-4所述的方法，其中所述不同密度区域是通过密度梯度来提供的。

6.根据权利要求1-5所述的方法，其中所述不同密度区域是通过密度垫层来提供的，所述密度垫层的密度小于所述RPBLA的密度。

7.根据权利要求1-3所述的方法，其中所述不同密度区域是通过低速离心匀浆后得到的上清液和沉淀来提供的。

8.根据权利要求1-7所述的方法，其中所述宿主细胞是高等植物细胞。

9.根据权利要求1-7所述的方法，其中所述宿主细胞是真菌细胞。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述真菌宿主细胞是酵母细胞。

11.根据权利要求1-7所述的方法，其中所述宿主细胞是藻类细胞。

12.根据权利要求1-7所述的方法，其中所述宿主细胞是动物细胞。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述动物宿主细胞是哺乳动物细胞。

14.根据权利要求1-13所述的方法，其中所述融合蛋白还包括位于蛋白体诱导序列和目的产物的序列之间的接头序列。

15.根据权利要求1-14所述的方法，其中所述蛋白体诱导序列包含谷醇溶蛋白或修饰的谷醇溶蛋白。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述谷醇溶蛋白序列是γ-玉米醇溶蛋白、α-玉米醇溶蛋白或大米谷醇溶蛋白。

17.根据权利要求1-16所述的方法，其中所述RPBLA的密度为约1.1g/ml至约1.35g/ml。

18.根据权利要求1-17所述的方法，其中所述匀浆是从新鲜生物质制备的。

19.根据权利要求1-17所述的方法，其中所述匀浆是从干燥生物质制备的。

20.根据权利要求1-19所述的方法，其包括回收RPBLA的附加步骤。