[发明专利]利用荧光测量产生脂质分布的测定

说明书

本发明涉及用于区别样品混合物中不同类别脂质分子的测定系统。特别地，本发明涉及确定血浆或血清中特定的脂质浓度的方法，以便产生脂质分布。本发明还涉及实施所述方法所用的装置。

脂质是有生命生物中存在的多种组的有机化合物。它们在水中是不溶的，但是可溶于有机溶剂。将脂质广泛分类成两个类别：(i)复杂脂质；和(ii)简单脂质。复杂脂质是长链脂肪酸的酯并且包括甘油酯类、糖脂类、磷脂类、胆固醇和蜡。不含有脂肪酸的简单脂质，包括类固醇(例如，胆固醇)和萜类。

脂质可以与蛋白质结合形成脂蛋白，其形式为其中诸如胆固醇和甘油三酯的脂质，在血液和淋巴中被输送。血浆中发现的脂蛋白属于三个主要分类：(i)高密度脂蛋白(HDL)，(ii)低密度脂蛋白(LDL)，和(iii)极低密度的脂蛋白(VLDL)，以及中间密度脂蛋白(IDL)。为了简洁，在这里使用术语“血清”，但是涉及“血浆”应当解释为涉及血浆或血清。

充分记载的是，在血浆中多种脂蛋白的浓度和动脉粥样硬化风险之间存在有力的关系，即有害斑块在血管壁上的发展可以导致心脏病发作。同样已知，不同类别的脂蛋白(HDL、LDL和VLDL)在动脉粥样硬化中各自起不同的作用。例如，将HDL认为是抗致动脉粥样化的(anti-atherogenic)，而已知LDL是高度致动脉粥样化的(它携带的胆固醇与动脉粥样硬化的发展密切相关)。VLDL被认为是轻微致动脉粥样硬化的，而且在女性中更显著。

因此，关于多种脂质成分的每一种(胆固醇，甘油三酯和脂蛋白，特别是LDL)在血液中的相对浓度的知识将是有利的，因为这将在治疗具有这些不适当的脂质血液浓度的患者中帮助临床医生。应当理解，具有患者脂质分布的知识对于临床医生将是最有利的。

已经开发了用于确定血液中一些脂质成分浓度的测定。这样的测定通常涉及首先从患者取血样，然后将其送到临床实验室用于分析。这样的测定必须利用昂贵的装置进行，并且需要相当长的时间以产生结果。这耽误治疗。而且，所述测试是复杂的，并且因此是昂贵的。另外，在实验室中使用的装置不容易便携，并且因此不能由GPs或护士在出诊时使用，或者甚至作为家用测试试剂盒使用。已经开发了试图在“治疗点(point of care)”再生实验室测定的装置，但是这些已经证明是昂贵的并且需要熟练的使用者操作。因此，存在提供用于分析血清中脂质分布的改进方法，以及用于实施这些方法的简单并相对便宜设备的需要。

血清是多种蛋白质的复杂混合物，并且虽然分离并直接测量不同类别脂蛋白浓度的方法是已知的，但是这样的方法是复杂而昂贵的。因此，广泛用于临床实验室的脂蛋白测定方法的一种方法是间接方法，其中重要的LDL浓度是利用Friedewald方程由总胆固醇浓度、甘油三酯浓度和HDL浓度的测量计算的：-

(CH-LDL)＝CH-(CH-HDL)-TG/5

其中CH是总胆固醇浓度、(CH-LDL)是胆固醇LDL浓度、(CH-HDL)是胆固醇HDL浓度，并且TG是甘油三酯浓度(包括背景水平的游离甘油)。

在可以计算LDL浓度以前，必须首先确定HDL、总胆固醇和甘油三酯的浓度。应当理解HDL、胆固醇或甘油三酯浓度测量中的任何误差将在LDL浓度的计算中复合。另外，常规的甘油三酯浓度测量不区别甘油三酯和游离甘油，其浓度可以改变，将进一步的误差引入到LDL浓度的计算中。因而，LDL浓度的计算固有地包括误差，其可以是非常显著的。这样的误差是在例如监控广泛使用的LDL减少的治疗(诸如饮食、药物等)的发展中的特别问题，其中必需精确监控相对小的LDL浓度的减少(一般数个百分点的级别)，同时甘油三酯水平可以显著变化。这在治疗具有冠心病史的患者中是特别尖锐的。

测定血清的脂蛋白浓度的备选方法公开在WO01/53829A1中。该文件涉及特别的有机发光体，4-二甲基氨基-4′-二氟甲基-磺酰-苯亚甲基-苯乙酮(DMSBA)，作为荧光探针的使用。所述探针的公式，确定为K-37，给定如下：-

探针K-37在水中不发光，但是在脂蛋白水溶液诸如血清中是高度发光的。特别是，荧光强度高度依赖于血清的脂蛋白含量并因而可以将K-37用作荧光探针以测量可能存在的脂蛋白浓度，即，当结合到脂蛋白的脂质并在适当辐射波长激发时K-37发荧光。因此，脂蛋白混合物的时间分辨荧光衰减的测量可用于直接产生关于存在于那个混合物中的不同脂蛋白(LDL，和VLDL)的相对浓度的信息。