[发明专利]液相色谱法

权利要求书

1.一种通过连续液相色谱从粗细胞溶解产物中无磁提纯一种或多种目标细胞成分的方法，所述方法包括

(a)将细胞溶解在容器中，提供粗细胞溶解产物；

(b)使由此得到的粗细胞溶解产物通过填有多孔颗粒色谱基质的色谱柱，以吸附所述的目标成分，其中所述颗粒的表面存在载有选自Ni²⁺离子、Cu²⁺离子和Zn²⁺离子的一种或多种金属离子的固定化次氮基三乙酸(NTA)配体；和，任选地，

(c)通过使所述基质与释放吸附组分的洗脱缓冲液接触，回收所述的目标成分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中(a)的溶解包括化学溶解。

3.根据权利要求1所述的方法，其中(a)的溶解包括机械溶解。

4.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中(a)的溶解包括化学溶解和之后的机械溶解。

5.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述的目标成分是蛋白和/或肽。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述的蛋白/肽用至少一个组氨酸残基标记。

7.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述色谱基质的结合容量为至少约30mg蛋白/ml基质，优选至少约40mg蛋白/ml色谱基质。

8.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其使用制备规模的体积和流速进行。

9.根据权利要求1-7中任意一项所述的方法，其使用分析规模的体积和流速进行。

10.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述的NTA配体已经通过硫醚连接固定化在所述的多孔颗粒上。

11.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述的NTA配体载有Ni²⁺离子。

12.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中所述颗粒的大小分布为45-165μm。

13.一种提纯目标细胞成分的方法，其包括：

(a)使用根据前述权利要求中任意一项所述的方法提纯目标成分；

(b)冲洗所述色谱基质；

(c)使用根据前述权利要求中任意一项所述的方法提纯目标成分；

其中(b)-(c)重复至多10次。

14.一种提纯目标细胞成分的方法，其包括：

(a)使用根据权利要求1-12中任意一项所述的方法提纯目标成分；

(b)溶出所述色谱基质上的Ni²⁺离子；

(c)对所述色谱基质进行原地清洗(cip)；

(d)将所述色谱基质重新载有Ni²⁺离子；和

(e)使用根据权利要求1-12中任意一项所述的方法提纯目标成分；

其中(b)-(e)重复至多30次。

15.根据权利要求14所述的方法，其中(b)的溶出之前是冲洗，所述冲洗之后继续提纯至少一次。