[发明专利]一种核酸聚合酶链式反应扩增的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域的聚合酶链式反应(PCR)扩增的方法，尤其是一种核酸聚合酶链式反应扩增的方法。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)技术由Mllis等人于1988年发明，由于其能在短时间内可在体外实现基因片段的大量复制，满足人们进行各种基因操作实验的需要，因此很快成为现代分子生物学中最重要的实验技术之一。

在过去的20多年的时间里，这一创时代的PCR技术在不断进步和发展中逐渐成熟，最终形成了一整套完整的技术体系。常规PCR技术操作简便，成功率很高，因而其在遗传学、微生物学乃至整个生命科学领域的研究中都得到了广泛应用。但是在实际应用过程中人们也发现，在许多情况下，通常的PCR方法不能获得令人满意的扩增结果，诸如特异性不高、产量较低或者扩增失效导致无产物出现等，其中对PCR反应影响较大的是扩增失效及扩增过程中非目的产物的出现，为了解决这一问题，近年来一个又一个功能强大的引物设计软件被开发出来，但高特异性引物只是提高PCR反应效率的一个方面，对反应体系及反应条件进行优化组合则是解决这一问题的主要方面。根据多年来各国科学家的研究成果我们发现，通过向PCR反应体系中添加一定量的优化剂可以在不同程度上减少或消除副反应的发生，这些优化剂包括DMSO，BSA，甘油，Tween-20，NP-40，甲酰胺等。但这些优化剂都有各自的局限性，在各种不同情况下效果差异很大，给应用带来不便，因此在PCR扩增技术方法中继续寻找新的反应优化剂，对提高PCR扩增技术水平并同时克服目前存在的实际问题有十分重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提出了一种核酸聚合酶链式反应扩增的方法，该方法通过在PCR反应体系中添加反应优化剂达到对DNA片段的有效扩增；该方法优化扩增的效果明显，优化剂采用普通化学试剂，价格便宜，可获得性强；该优化剂易于长期室温保存，使用方便。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种核酸聚合酶链式反应扩增的方法，其特征在于：

(1).有机溶剂的灭菌；

(2).PCR体系的配置；

(3).PCR体系的优化；

(4).PCR条件的设定与运行；

(5).PCR产物检测。

而且，所述的PCR体系的优化是在PCR反应体系中添加适量的有机溶剂。

而且，所述有机溶剂的是指：系列酯类，包括乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸丁酯；系列醇类，包括丙醇，异丙醇，正丁醇，异丁醇，仲丁醇，叔丁醇，正己醇；系列酮类，包括2-丁酮。

而且，所述的有机溶剂是指：纯度为分析纯及以上级别的试剂。

而且，所述的PCR扩增方法包括：常规PCR、低拷贝数PCR扩增、长片段PCR、复杂模板PCR、高GC含量的PCR、反复扩增的PCR以及含有较多重复序列的PCR扩增。

本发明的优点和有益效果是：

1.本发明中所述的用于PCR扩增优化剂的多种有机溶剂，具有和已有PCR优化剂相比拟的效果，对PCR扩增的优化效果较为明显，且副作用少。本发明拓宽了可用于PCR优化剂的有机溶剂的应用范围，为满足不同实验内容的需要提供了更宽的选择范围。

2.本发明中所涉及的采用有机溶剂作为优化剂的核酸聚合酶链式反应扩增的方法，其所用的PCR优化剂为普通化学试剂，价格便宜，可获得性强；优化剂易于长期室温保存，使用方便。

3.该应用有机溶剂为优化剂的核酸聚合酶链式反应扩增的方法简单易掌握，使用简便。

附图说明

图1为本发明乙酸丙酯优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图2为本发明乙酸丁酯优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图3为本发明丙醇优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图4为本发明异丙醇优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图5为本发明正丁醇优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图6为本发明异丁醇优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图7为本发明仲丁醇优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图8为本发明叔丁醇优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图9为本发明正己醇优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

图10为本发明2-丁酮优化扩增片段长度为15kbDNA片段的结果的电泳图；

具体实施方式