[发明专利]一种亲和人白蛋白核酸适配子的制备与用途

权利要求书

1.一种亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于核苷酸序列为：

ATCCGCCTGATTAGCGATACTGGGACTGACTGATACGAAGG

CATGATTGGGACACTACTTGAGCAAAATCACCTGCAGGG或

ATCCGCCTGATTAGCGATACTGCGGAATTGGATGAATCGGG

ACCACGCGAGTATATACTTGAGCAAAATCACCTGCAGGGG

所示的DNA分子。

2.根据权利要求1所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：单链DNA序列为附图1所示的両种结构之一。

3.根据权利要求1所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：具有相同功能的寡核苷酸适配子同源序列占60％以上。

4.根据权利要求1所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：衍生的RNA序列具有相同的功能。

5.根据权利要求1所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：为能与DNA序列进行杂交的寡核苷酸序列。

6.根据权利要求1所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：在核酸适配子的任何位置删除或增加部分寡核苷酸残基所得到的寡核苷酸适配子序列具有相同的功能。

7.根据权利要求1所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：在核酸适配子的任何位置进行核苷酸种类和稀有碱基的置换后，得到的寡核苷酸适配子序列具有相同的功能。

8.根据权利要求1所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：在核酸适配子的任何位置进行磷酸化、甲基化、氨基、巯基、同位素、生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料或酶标记修饰后，得到的寡核苷酸适配子序列具有相同的功能。

9.根据权利要求1-8中任何一种所述的亲和人白蛋白核酸适配子，其特征在于：用于人白蛋白的检测和分离纯化。

10.一种亲和人白蛋白核酸适配子的制备方法，体外筛选与人白蛋白特异结合的核酸适配子，其特征在于实施步骤如下：利用

引物1：5′-ATCCGCCTGATTAGCGATACT-3′和

引物2：5′-biotin-CCCCTGCAGGTGATTTTGCTCAAGT-3′扩增单链DNA库，将5’端带有生物素标记的双链DNA产物与链酶亲和素磁珠结合，在室温条件下，作用30分钟；然后用浓度为0.15mol/L的NaOH溶液，反应15分钟，使双链DNA变性解链；磁分离得到单链DNA；经空硝酸纤维素膜反筛后的单链DNA与鲑鱼精DNA及白蛋白共同孵育；单链DNA通过白蛋白结合于硝酸纤维素膜上，将单链DNA从白蛋白上洗脱下来，用作扩增的模板，进行下一轮筛选；共进行1 2轮筛选，且在最后几轮筛选中，加入低于100ng白蛋白，以便得到预期具有高亲和力的寡核苷酸；以第12轮筛选所得文库为模板进行PCR；

琼脂糖电泳后回收81bp处片断，与T载体在4℃的条件下持续反应16～18小时，转化感受态细胞；涂板进行蓝白斑筛选，在37 ℃条件下培养16～18小时后，挑取单克隆白斑，置氨苄液体培养基摇菌16～18小时；提取质粒，经PCR鉴定有目的条带者进行序列测定。如图1所示81bp的目标条带。