[发明专利]囊泡导向的免疫细胞及其在制备抗肿瘤药物上的应用

权利要求书

1.一种囊泡导向的T细胞，其特征在于：由T细胞摄取树状细胞或肿瘤细胞衍生的囊泡而形成的具有免疫刺激作用的细胞，所述囊泡是直径50-90nm的细胞膜囊泡。

2.一种免疫活性药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1所述囊泡导向的T细胞以及药用载体。

3.如权利要求2所述的免疫活性药物组合物，其中所述囊泡来自于树状细胞或工程化的树状细胞或工程化的肿瘤细胞。

4.如权利要求2所述的免疫活性药物组合物，其中所述囊泡导向的T细胞是具有Th₁或Th₂特征、由CD4⁺T细胞摄取囊泡而形成的具有表达pMHCI、CD54和CD80的T细胞。

5.如权利要求2所述的免疫活性药物组合物，其中还包含免疫佐剂。

6.如权利要求5所述的免疫活性药物组合物，其中所述免疫佐剂包括格兰氏阴性细菌内毒素的类脂质A部分、溴化磷酯、线形聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物、矿物盐或脂质体细胞因子。

7.权利要求1所述囊泡导向的T细胞的制备方法，其特征在于：

其中由树突细胞衍生的囊泡导向的T细胞的制备包括以下步骤：

1)ConA激活的CD4⁺T细胞的制备：在含有IL-2和ConA的RPMI1640培养基中培养脾脏细胞，分离得到ConA激活的CD4⁺T细胞，

2)囊泡的制备：在高剂量GM-CSF和IL-4的作用下，产生骨髓来源树突细胞，将此树突细胞在含有OVA蛋白的无血清AIM-V培养基中培养，离心所得上清液，得到囊泡沉淀物，

3)ConA激活的CD4⁺T细胞对所述囊泡的摄取：在含有IL-2的AIM-V培养基中，将步骤1)所得的CD4⁺T细胞与步骤2)所得的囊泡共培养，得到摄取所述囊泡的ConA激活的CD4⁺T细胞；及

由工程化肿瘤细胞衍生的囊泡导向的T细胞的制备包括以下步骤：

1)pcDNA-CD80表达载体的构建：抽提树突细胞的RNA，用RT-PCR法克隆CD80基因，并构造pcDNA-CD80基因表达载体，

2)转染细胞系EG7/CD80的产生：将步骤1)所得表达载体转化到肿瘤细胞EG7中，获得EG7/CD80肿瘤细胞，

3)囊泡的制备：在无FCS的AIM-V培养基中，培养步骤2)所得的肿瘤细胞EG7/CD80，离心培养所得上清液，得到囊泡沉淀物，

4)CD4⁺T的激活：从脾脏中分离得天然CD4⁺T细胞，将此细胞在含有抗CD3抗体、IL-2的培养基中培养，所述培养基还包含IL-12和抗IL-4抗体，或IL-4、IL-10、TGF-β和抗IFN-γ抗体，

5)CD4⁺T对囊泡的摄取：将步骤3)所得囊泡和步骤4)所得CD4⁺T细胞，在含有IL-2的培养基中共培养，得到摄取囊泡的CD4⁺T细胞。

8.权利要求1所述囊泡导向的T细胞在制备抗肿瘤、抑制自身免疫疾病和/或抑制排异反应的药物上的应用。