[发明专利]囊泡导向的免疫细胞及其在制备抗肿瘤药物上的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及免疫调节及疾病防治，更具体涉及提供一种免疫活性药物组合物，包含有效量的囊泡导向的免疫细胞，及其在制备抗肿瘤、抑制自身免疫疾病和/或抑制排异反应的药物上的应用。 

背景技术

树状细胞(Dentritic cell，DC)在囊泡室中加工外来抗原，如多泡囊泡(1)可以与细胞膜融合，然后释放出抗原提呈小泡称为囊泡(Exosome，EXO)(2-4)。囊泡是直径为50-90nm含有抗原提呈分子(MHCI，MHCII，CD1，hsp70-90)；四聚体分子(CD9，CD63，CD81)；黏附分子(CD11b，CD54)和协同刺激分子CD86等启动潜在免疫应答所必需的元件(5-7)。Zitvogel等第一次报道了树突细胞衍生的囊泡可以成功地用做疫苗来去除动物模型中的肿瘤(4)。来自树突细胞的临床级别囊泡也已获得(8)。然而，用树突衍生的囊泡进行免疫治疗还有他的局限性，其中最大的局限在于识别肿瘤抗原的有效性。后来发现肿瘤细胞衍生的囊泡可以携带肿瘤抗原启动有效的抗肿瘤免疫应答(9-11)。而且，肿瘤衍生的囊泡如那些来自于肿瘤腹水的囊泡可以提供一种新来源的非细胞囊泡作为肿瘤疫苗(12)。最近更多的研究表明囊泡疫苗在不同的动物模型中已确认具有诱导肿瘤免疫的作用(13-16)。然而，在大多数研究中，囊泡疫苗仅是诱导预防型的抗肿瘤免疫应答，而不是治疗已存在的肿瘤。在最近的I期临床实验中使用囊泡疫苗，检测发现在所有15个黑色素瘤病人的外周血中没有发现肿瘤特异型的T细胞应答。只有一个病人表现出对肿瘤生长的部分应答(17)。在另外的I期临床实验中使用囊泡疫苗，在9个后期非小细胞肺癌病人中，只在3个病人中发现对MAGE肽的迟发性超敏反应(18)。所以，囊泡疫苗的免疫途径和效率需要进一步提高。 

囊泡的pMHCI和pMHCII复合物具有功能，但可能需要转移到树突细胞中才能提高T细胞的激活，从而导致肿瘤的消除(14，19，20)。而且囊泡在体内介导的抗肿瘤免疫的潜在途径可能是通过不成熟的DC对EXO的摄取，反过来再通过携带有囊泡的树突细胞上的pMHC复合物和协同刺激分子来激活抗原特异性的T淋巴细胞。我们先前发现树突细胞疫苗抗肿瘤免疫的效率依赖于树突细胞的成熟程度，成熟的树突细胞效率高，半成熟的树突细胞效率低(21)。而且囊泡疫苗的效率低可能与囊泡在体内被不成熟的树突细胞所摄取有关。为了提高抗肿瘤免疫的效率，CpG佐剂结合在树突细胞表面的Toll样受体9上，可使树突细胞成熟和激活(22)，这种方法在体内已被应用到结合囊泡，提高囊泡诱导的细胞毒反应(15)。所以，本发明者设想在体外携带囊泡的成熟树突细胞的应用可以成为一种新型的更有效的调整肿瘤特异的免疫应答的途径。 

给动物提供弱化的T淋巴细胞显示可刺激免疫抑制，阻止实验中自身免疫疾病的发展(23，24)。囊泡可通过抗原特异性的pMHC/TCR和非特异性的CD54/LFA-1相互作用被T细胞摄取(25，26)。最近研究显示CD4⁺T细胞可以通过APC的激活获得APC膜分子，这些激活的CD4⁺T获得了pMHCI和协同刺激分子CD54和CD80，可进一步激活肿瘤特异性的细胞毒T淋巴细胞免疫应答(27)。CD4⁺T细胞获得APC分子的一个潜在机制可能是CD4⁺T细胞摄取了树突细胞释放的囊泡。所以，本发明者设想在体外摄取囊泡的CD4⁺T细胞可能也可以成为一种新的针对肿瘤特异性免疫应答的更有效的途径。 

在上述两项设想的启发下，本发明者利用不同来源的树突细胞及其衍生的囊泡与不同来源的T细胞相互作用，制备得到一种免疫活性药物组合物，通过动物实验证实此药物组合物具有免疫活性，从而完成了本发明。 

因此，本发明的第一个目的是提供一种囊泡导向的T细胞。 

本发明的第二个目的是提供一种免疫活性药物组合物。 

本发明的第三个目的是提供囊泡导向的T细胞的制备方法。 

本发明的第四个目的是提供囊泡导向的T细胞在制备抗肿瘤、抑制自身免疫疾病和/或抑制排异反应的药物上的应用。 

发明概述 

本发明第一方面提供的囊泡导向的T细胞是由T细胞摄取树状细胞或肿瘤细胞衍生的囊泡而形成的具有免疫刺激作用的细胞，所述囊泡是直径50-90nm的细胞膜囊泡。 

本发明第二方面提供的免疫活性药物组合物，包含治疗有效量囊泡导向的T细胞以及药用载体。