[发明专利]重组人白细胞介素－4的生产方法

权利要求书

1.一种编码重组人白细胞介素-4的DNA序列，其特征在于，其DNA序列与SEQID NO：1所示的序列有区别，但编码如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.一种表达载体，其特征在于，它含有权利要求1所述的DNA序列。较佳地，所述的表达载体是pET30a(+)/IL-4。

3.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求2所述的表达载体或权利要求1所述的编码重组人白细胞介素-4的DNA序列。

4.一种生产重组人白细胞介素-4的方法，其特征在于，它包括步骤：

a)在适合的表达条件下，培养如权利要求4所述的宿主细胞，从而表达出人白细胞介素-4蛋白；较佳地，所述的宿主细胞是大肠杆菌细胞BL21(DE3)。

b)分离纯化出表达的人白细胞介素-4蛋白。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的宿主细胞是大肠杆菌。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中进行高密度悬浮培养。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步骤(b)包括步骤：

(i)   对发酵样品通过离心和/或过滤方式去除上清，获得发酵后菌体；

(ii)  对发酵沉淀进行匀浆破菌、洗涤获得包涵体；

(iii) 对包涵体进行变性溶解

(iv)  层析纯化，所述的层析选自：凝胶过滤层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析及其组合。

(v)   采用透析复性的方法，复性上清再进行阳离子交换层析进行浓缩。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的培养条件是：培养温度为30-40℃，更佳地34-38℃；pH在6～8之间，更佳地在6.5～7.5之间；葡萄糖或甘油浓度为0.1～5％，更佳地在1.0％；添加维生素B1作为补充维生素；微量元素可加0.1-2ml/L培液；诱导剂为IPTG浓度在0.1-1mg/L之间，诱导前OD600在0.5～20之间，更佳地在1～10之间；诱导时间0.5～10小时，更佳地1～5小时。

9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的纯化条件是：对发酵样品进行离心获得发酵后沉淀；沉淀变性后经凝胶过滤层析、Q Sepharose F.F.层析、SP-Sepharose F.F.层析、透析复性、浓缩，获得纯度98％以上的纯品。

10.重组人白细胞介素-4，包括用权利要求2所述的表达载体转化的寄主细胞，培养转化体，从培养物获得重组人白细胞介素-4的步骤的方法制备。