[发明专利]甲醇酵母生产人激肽释放酶－1

说明书

一、技术领域

本发明是采用基因工程的手段，通过甲醇酵母(Pichia pastoris)表达系统大规模获得一种新型重组蛋白-------甲醇酵母表达的重组人激肽释放酶-1(Recombinant HumanKallikrein-1，r-hK₁)，特别对r-hK₁分子性质的研究，以及体内、体外活性的测定和试验，表明r-hK₁可望成为治疗脑梗塞的药物。

二、背景技术

早在1926年，Frey等就从人尿液中获得了一种能引起血压下降的成分，当时称之为血管舒缓素，不过，后来的研究者发现，该蛋白酶类成分也广泛分布于血浆、胰腺、肾脏、唾液腺、肠、胰液之中，尤其胰腺中含量最高。1930年，希腊的Kraut H.等将从胰腺分离提取的这种成分命名为Kallikrein(希腊语Kallikreas是‘胰腺’，故称胰腺中获得的蛋白酶类为Kallikrein)。但是，随着对这一类蛋白酶功能、分布和作用机理等方面的深入研究，在不同时期，研究人员对Kallikrein有着不同的称谓，例如Kininogenase、Kallidinogenase和Kininogenin。事实上，在中文译名中，‘激肽释放酶’‘激肽原酶’、和‘激肽酶’等称谓也是混用的。目前，国内对Kallikrein的中文译名的使用也不统一，甚至近年来国内发表的文章中仍对同一种成份使用不同名称，例如‘尿激肽原酶’、‘尿激肽释放酶’、‘胰激肽原酶’、‘胰腺激肽释放酶’、‘组织激肽释放酶’等。

在本专利中Kallikrein一词译为‘激肽释放酶’，Kininogenase、Kallidinogenase和Kininogenin这三个词中包含有激肽原或激肽一词的词根，似乎应称为‘激肽原酶’更妥。虽然‘激肽释放酶’或‘激肽原酶’最早是在胰腺等特定组织器官中发现的，但是，由于其在动物体内分布广、种类多，所以，在本专利的描述中将不再用组织或器官或来源等词语来限定提及的某种激肽释放酶。

早期，研究者将人的激肽释放酶(Human Kallikrein，下文中简称hK)分成血浆型和组织型两大类。血浆型hK主要是在人的肝脏中表达，再分泌进入血液的，它参与血液的凝固、纤维蛋白的水解、血压的调节和炎症反应等生理过程；而组织型hK，是在胰腺、肾脏、唾液腺、乳腺、卵巢、睾丸和前列腺等部位产生，能对一些多肽(如，激肽原、胰岛素原、肾素原等)进行翻译后加工，从中释放出具有生理活性肽类(如，激肽，胰岛素、肾素等)。现在，根据含量的高低以及发现的先后顺序，国际上已经统一将除血浆型hK之外的所有组织型hK进行了命名，依次为hK₁、hK₂、hK₃.......hK₁₅等，目前已经发现并命名的有15种之多(陈渝春国外医学·生理、病理科学与临床分册.2003，23(4)：386～88；Yousef GM，ObiezuCV，etal Human tissue kallikreins：from gene structure to function and clinical applications.Adv.in Clin.Chem.2005，39：11-79.)。追溯早期研究者所描述的组织型hK，也就是来自胰腺、肾、唾液腺和尿液中hK不难发现，它并不包括后来发现并命名的这些种类的组织型hK。实际上，早年文献中所说的组织型激肽释放酶、胰腺激肽释放酶、唾液腺激肽释放酶等按新分类标准，都是同一种成分，应该称之为人激肽释放酶-1(Human Kallikrein 1，简称hK₁)，这也是本专利要描述的对象。本专利中将酵母分泌表达的hK₁称为重组人激肽释放酶-1(Recombinant Human kallikrein-1，简称r-hK₁)。