[发明专利]非小细胞肺癌疗效相关的EGFR基因突变的快速检测

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域，更具体的，本发明涉及非小细胞肺癌疗效相关的EGFR基因突变的快速检测。

背景技术

肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，近几十年来，世界各国特别是工业发达国家，肺癌的发病率和病死率均迅速上升，男性肺癌占各种癌病死因第一位，女性则仅次于乳腺癌占第二位。按传统的组织病理学分类，肺癌可大致划分为小细胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)和非小细胞肺癌(non small cell lungcancer，NSCLC)。其中NSCLC约占肺癌患者总数的三分之二。到目前为止，治疗NSCLC的方法仍以外科手术为主，但因早期诊断上的困难，几十年来生存率问题并没有获得根本的改善(Schiller JH.，Oncology，2001，61(Suppl 1)：3-13；Sridhar SS，Seymour L，Shepherd FA.，Lancet Oncol，2003，4(7)：397-406)。

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一种受体型酪氨酸激酶，由其介导的信号传导功能的增强是人类多种癌症包括NSCLC重要发病机理之一，因此成为一个最有潜力的肿瘤治疗靶标(Jorissen RN，Walker F，Pouliot N等，Epidermal growth factor receptor：mechanisms of activation andsignaling[J].Exp Cell Res，2003，284(1)：31-53.)。Iressa(学名gefitinib，易瑞沙)及Tarceva(学名erlotinib，它赛瓦)就是针对这一靶标设计的新型口服抗癌药物，分别由AstraZeneca及Roche公司生产上市。其临床应用使许多的NSCLC患者受益(Fukuoka M等，J Clin Oncol，2003，21(12)：2237-2246；Kris MG等，JAMA，2003，290(16)：2149-2158；Wakeling AE等，Cancer Res，2002，62(20)：5749-5754)。但并非所有的NSCLC患者都能从中受益，其有效率与患者种族、性别、吸烟史、癌细胞类型等因素有关。但最新研究显示，这两种药物的疗效与NSCLC组织中EGFR基因外显子18、19、20、21上的功能突变呈正相关(LynchTJ等，N Engl J Med，2004，350(21)：2129-2139；Paez JG等，Science，2004，304(5676)：1497-1500；Shigematsu H等，Journal of the National Cancer Institute，2004，97(5)：339-346)。因此，检测相关EGFR功能性突变，可准确预测此两种药物的疗效。

目前检测该类突变的方法限于对肺癌组织中EGFR基因相关突变位点区域DNA进行测序。但因其检测周期长、检测过程复杂及所需仪器设备昂贵，难以广泛应用到临床。其过程包括：肺癌组织基因组DNA提取(3小时)，目标DNA片段的PCR扩增(3小时)，测序反应及产物纯化(5小时)，凝胶电泳(依所用测序仪，3-9小时)，序列分析(1小时)。存在的问题：(1)检测周期长，从收到待检样品到顺利完成检测发出报告，需要连续的15-21小时。如以正常工作时间进行检测，实际至少需要3个工作日才能发出检测结果报告，因此，难以满足指导临床用药时效性的要求。(2)检测过程复杂，对检测人员的技术要求高，如检测人员缺乏丰富的DNA测序知识和经验很容易导致检测失败。(3)测序法所用仪器设备昂贵，临床广泛应用有困难。

因此，目前迫切需要开发一种快速、准确、操作简便及对设备要求低的肺癌组织中EGFR基因突变检测技术，来改变现有状况，从而满足临床用药的时效性要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于检测非小细胞肺癌疗效相关的EGFR基因突变的试剂盒。

本发明的目的还在于提供一种快速、准确、操作简便及对设备要求低的肺癌组织中EGFR基因突变检测方法。

在本发明的第一方面，提供一种用于检测非小细胞肺癌药物疗效相关的EGFR基因突变的试剂盒，所述的试剂盒包括容器以及装于容器中的以下引物探针组合体：

(a)组合体1：SEQ ID NO：11所示的正向引物+SEQ ID NO：12所示的反向引物+SEQ ID NO：1所示的野生型探针+SEQ ID NO：2所示的突变型探针；