[发明专利]一种平行的多位点基因型实时定量检测技术

权利要求书

1.一种平行测定样品中多种核酸分子的存在或量的方法，该方法包括以下步骤：

a)提供一样品，所述样品中包含待检测的核酸分子；

b)对所述核酸分子进行核酸连接酶反应，得到经荧光基团标记的连接产物；

c)提供一固相载体，所述载体表面不同的位置固定了多种识别核酸探针分子；

d)使所述识别核酸探针分子与所述样品液相接触，从而使所述经荧光基团标记的连接产物与所述识别核酸探针分子结合；

e)用激发光源在固相载体与液体界面处产生倏逝场，使得与所述探针分子结合的所述连接产物上的荧光基团被激发产生荧光信号；

f)检测所述荧光信号的位置和强度，从而确定样品中多种核酸分子的存在或量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤b)中，所述核酸连接酶反应包括使用探针对和DNA连接酶，所述探针对覆盖所述待检测的核酸分子，所述探针对中的一个探针被荧光基团标记，另一个探针与所述识别核酸探针分子特异性结合，反应至少包括核酸变性、核酸连接的步骤。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤b)中，通过使用有荧光基团标记的脱氧核苷三磷酸、有荧光基团标记的寡核苷酸、或其组合使连接产物被荧光基团标记。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相载体选自玻璃、尼龙膜、石英、陶瓷、金属、塑料或有机聚合物；所述识别核酸探针分子通过化学键连接、物理吸附、聚合物包埋、蚀刻或粘联的方式固定在载体表面；

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相载体上镀有小于1000纳米厚的金属膜，或者直径小于1000纳米的金属颗粒，其中所述金属选自金、银、铜。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)中还包括联合应用聚合酶链反应进行扩增。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述倏逝场是通过在所述固相载体内发生的光的全反射，或者通过平面波导产生的。

8.一种平行测定样品中多种核酸分子的存在或量的方法，该方法包括以下步骤：

a)提供一样品，所述样品中包含待检测的核酸分子；

b)对所述核酸分子进行核酸连接酶反应，得到经第一荧光基团标记的连接产物；

c)提供一固相载体，所述载体表面不同的位置固定了多种识别核酸探针分子，所述识别核酸探针分子上结合有第二荧光基团，其中所述第二荧光基团的发射谱与所述第一荧光基团的激发谱重叠，或所述第一荧光基团的发射谱与所述第二荧光基团的激发谱重叠；

d)使所述识别核酸探针分子与所述样品液相接触，从而使所述经第一荧光基团标记的连接产物与所述识别核酸探针分子相互结合；

e)用光激发所述第一荧光基团和所述第二荧光基团中的一个；

f)检测所述第一荧光基团和所述第二荧光基团中的另一个的信号发射的荧光位置和强度，从而确定样品中多种核酸分子的存在或量。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，在所述步骤b)中，所述核酸连接酶反应包括使用探针对和DNA连接酶，所述探针对覆盖所述待检测的核酸分子，所述探针对中的一个探针被荧光基团标记，另一个探针与所述识别核酸探针分子特异性结合，反应至少包括核酸变性、核酸连接的步骤。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述第一荧光基团和第二荧光基团在相距1-10纳米时，一个荧光基团能吸收另一荧光基团发射光的能量而被激发。