[发明专利]治疗腹泻的药物及其制备方法

权利要求书

1.一种制备人小肠三叶因子蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将携带人小肠三叶因子基因的表达载体转化到毕赤酵母中；

(2)将(1)获得的毕赤酵母置于基本盐培养基中进行发酵，获得发酵液；

(3)从发酵液中分离出人小肠三叶因子蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的人小肠三叶因子蛋白中，双体形式的人小肠三叶因子蛋白的量占总的人小肠三叶因子蛋白的量大于80％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基本盐培养基含有：磷酸22-32ml/L，硫酸钙0.8-1.1g/L，硫酸钾15-21g/L，硫酸镁12-17g/L，氢氧化钾3-6g/L，甘油30.0-50.0g/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基本盐培养基中添加10-15ml/L PTM1微量元素溶液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)包括：

以SPXL阳离子交换层析和SOURCE 30Q阴离子交换层析两步法从发酵液中纯化人小肠三叶因子蛋白。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的SPXL阳离子交换层析包括步骤：

(1)将发酵液调整PH至3.5-4.0，调整电导率为6-8ms/cm，离心收集上清；

(2)以18-22mM甲酸溶液(pH3.5-4.0)平衡SPXL阳离子交换层析柱，将(1)中获得的上清上柱；

(3)以0～100％的含有0.8-1.2M NaCl和18-22mM甲酸的溶液(pH3.5-4.0)进行梯度洗脱；

(4)收集洗脱峰样品。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的SOURCE 30Q阴离子交换层析包括步骤：

(1)以18-22mM Tris-HCl调整SPXL阳离子交换层析的洗脱峰样品至pH8.5-9.0；

(2)以18-22mM Tris-HCl(pH8.5-9.0)的缓冲液稀释(1)的样品至电导率为7.0-7.5ms/cm；

(3)以18-22mM Tris-HCl(pH8.5-9.0)平衡SOURCE 30Q阴离子交换层析柱，将(2)的样品上样；

(4)以0-100％的含有18-22mM Tris-HCl和0.8-1.2M NaCl的溶液(pH8.5-9.0)进行梯度洗脱；

(5)收集洗脱峰。

8.一种采用权利要求1所述的方法获得的人小肠三叶因子蛋白。

9.权利要求8所述的人小肠三叶因子蛋白的用途，其特征在于，用于制备治疗腹泻、胃炎、肠炎、消化性溃疡、或炎症性肠病的药物。

10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有：

(i)有效量的权利要求8所述的人小肠三叶因子蛋白；以及

(ii)药学上可接受的载体。